ГОСТ Р ИСО 10993.3-99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 3. Исследование генотоксичности, канцерогенности и токсического действия на репродуктивную функцию

     4 Методы изучения генотоксичности

4.1 Общие положения

В случае, когда необходимо оценить генотоксическое действие медицинского изделия, следует провести серию тестов in vitro. Эта серия должна включать по крайней мере три испытания. При этом по меньшей мере два из них необходимо выполнить на клетках млекопитающих - клетках мишенях. Желательно, чтобы эти тесты распространялись на три уровня генотоксических эффектов: ДНК-воздействие, генные мутации и хромосомные абберации.

Примечание - Тесты ОЭСР 471 и 473 показали себя весьма ценными. В случае необходимости их можно подкрепить тестом 476.

Все исследования на животных необходимо осуществлять в соответствии с 4.1 ИСО 10993-2 [39].

Исследования медицинских изделий на генотоксичность следует осуществлять в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993.1, за исключением изделий из негенотоксичных материалов, и более того, когда все основные компоненты экстрактов, которые могут быть идентифицированы подходящими аналитическими методами, проявили себя как не обладающие генотоксичностью (см. также таблицу 1 ГОСТ Р ИСО 10993.1).

4.2 Приготовление проб

Перед приготовлением экстрактов и началом испытаний все материалы или изделия должны быть в готовом к употреблению виде (т.е. в виде конечной продукции). Тестированию подвергают либо экстракты, либо растворенные в подходящей среде материалы. Если необходимо использовать два вида экстрагирующих сред, то одна из них может быть физиологическим раствором, а вторая, например, - раствором диметилсульфоксида, который вполне совместим с тест-системой.

Внимание! Диметилсульфоксид (ДМСО) является цитотоксичным в отдельных тест-системах при концентрациях, превышающих 5 г/л в водном растворе. Необходимо использовать максимально возможные соотношения площади поверхности к объему экстрагирующей среды (выраженные в см/мл). Материалы и изделия, на которые наносят лечебные средства перед употреблением, следует исследовать с нанесенным лечебным средством и без него. Экстракцию необходимо проводить в закрытых емкостях с минимальным пространством для равновесной газовой фазы.

Для обеспечения сопоставимых результатов экстракты желательно выдерживать при температуре 37 °С не менее 24 ч.

Необходимо учитывать возможность получения двойственных результатов.

Примечание - Приготовление проб приведено в ГОСТ Р ИСО 10993.12 и может использоваться вместо настоящего пункта.

4.3 Методы исследования

4.3.1 Генотоксичность in vitro

Методы тестирования можно выбрать из руководства ОЭСР по испытанию химических соединений - тесты 471-473, 476, 479, 480-482.

Примечание - В некоторые изделия входят соединения, которые по замыслу разработчиков действуют на клетки, например антибиотики или антисептики.

4.3.2 Генотоксичность in vivo

Если есть научные доказательства или результаты исследований in vitro, указывающие на наличие потенциальной генотоксичности, то следует провести тесты in vivo. Методы тестирования можно выбрать из руководства ОЭСР по испытанию химических соединений: 474, 475, 478, 483-485.

Примечание - В последнее время разрабатываются тестовые системы с применением трансгенных животных, предназначенные для тестирования на генотоксичность. Эти методики возможно будут весьма полезны при исследовании имплантации, но на дату издания настоящего стандарта использование этих тестов еще не было узаконено. Описание тест-систем с применением трансгенных животных содержится в литературе, приведенной в A.1.