3.1. Приготовление растворов и реактивов
3.1.1. Раствор сульфата железа (FeSO
) концентрацией 80 г/дм
: 8,0 г сульфата железа переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. При использовании соли в виде кристаллогидратов проводят соответствующий пересчет на безводную соль.
3.1.2. Раствор аммония железа (III) сульфата Fe(NH)(SO)
·12НО концентрацией 50 г/дм: 5,0 г аммония железа (III) сульфата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
3.1.3. Раствор железа (III) аммония цитрата концентрацией 50 г/дм: 5,0 г железа (III) аммония цитрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
3.1.4. Раствор железа треххлористого (FeCl
·6HO) концентрацией 80 г/дм: 8,0 г железа треххлористого гексагидрата переносят в колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
3.1.5. Раствор сульфита натрия (натрия сернистокислого), концентрацией 100 г/дм: 10,0 г натрия сернистокислого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
3.1.6. Растворы, приготовленные по пп.3.1.1-3.1.5, стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.
3.1.7. Раствор железа (III) цитрата (С
Н
О
Fе·5НО) концентрацией 50 г/дм: 5,0 г железа (III) цитрата пентагидрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.
3.1.8. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.9. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.10. Реактив для определения каталазы готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Голодный агар готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.2. Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.3. Мясо-пептонный агар (бульон) с 0,1% глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.4. Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.5. Железосульфитная среда: к 1 дм дистиллированной воды добавляют 10,0 г триптона, 0,5 г сульфита натрия, 0,5 г железа (III) цитрата, 15,0 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после этого смесь охлаждают до (50±5) °С. Устанавливают рН среды таким образом, чтобы он составлял (7,1±0,1) (в пересчете на (25±1) °С). Среду разливают в пробирки по 10-12 см или колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение 15 мин.
Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина, а триптон и 1 дм воды могут быть заменены на 1 дм мясной воды, приготовленной по п.3.2.2.
3.2.6. Триптозо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.
3.2.7. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда: в 800 см воды вносят 10,0 г пептона, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1, 5,0 г уксуснокислого натрия. Отдельно 1,0 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см смеси, содержащей остальные компоненты, добавляют 15,0 г агара при приготовлении плотной среды или 1,5 г агара при приготовлении вязкой среды и кипятят 30 мин. Доводят объем среды до 1 дм, добавляют 1,0 г глюкозы и 0,5 г 
-цистеина гидрохлорида, охлаждают среду до (50±5) °С. Устанавливают рН таким образом, чтобы он составлял (7,1±0,1) (в пересчете на (25±1) °С). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин. Перед использованием к 100 см среды добавляют 0,4 см раствора сульфита натрия, приготовленного по п.3.1.5, и 2 см раствора железа (III) цитрата, приготовленного по п.3.1.7. При необходимости среду разливают в пробирки по 10-12 см.
3.2.8. Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов: к 1 дм стерильного, расплавленного и охлажденного до (80±1) °С мясо-пептонного агара, приготовленного по п.3.2.3, или среды, приготовленной по п.3.2.4, добавляют 10 см раствора сульфита натрия, приготовленного по п.3.1.5, и 1 см раствора аммония железа (III) сульфата, приготовленного по п.3.1.2. Среду хранят в защищенном от света месте при (6±2) °С не более 7 сут.
Допускается заменять раствор аммония железа (III) сульфата раствором железа (III) аммония цитрата или раствором сульфата железа (FeSO·5НО), или раствором железа (III) цитрата, при этом также используют растворы концентрацией 50 г/дм.
Если использовать раствор сульфата железа, приготовленного по п.3.1.1, то на 1 дм среды его добавляют 0,4 см.
3.2.8.1. Среда Вильсон-Блера (вязкая), измененная для анаэробов: к 1 дм мясо-пептонного бульона с 0,1% глюкозы и дрожжевым экстрактом, приготовленным по п.3.2.3, добавляют 1,5 г агара. Нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до (50±5) °С. Устанавливают рН среды таким образом, чтобы он соответствовал (7,1±0,1) (в пересчете на (25±1) °С). Среду разливают мерно в колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение 20 мин, затем к среде добавляют растворы, указанные в п.3.2.8, для определения сульфитредуцирующей способности.
3.2.8.2. При приготовлении среды Вильсон-Блера агаризованной или вязкой допускается вместо растворов, указанных в п.3.2.7, использовать на 100 см среды для определения сульфитредуцирующей способности 4 см раствора сульфита натрия, приготовленного по п.3.1.5, и 1 см раствора железа треххлористого, приготовленного по п.3.1.4. В этом случае готовая среда не подлежит хранению.
3.2.9. Среду Китт-Тароцци без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.
