ГОСТ 29184-91
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
Food products. Methods for detection and quantity determination of family Enterobacteriaceae
MКC 07.100.30
ОКСТУ 9109
Дата введения 1993-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 23.12.91 N 2049
3. Настоящий стандарт соответствует ИСО 7402-1985 "Микробиология. Общее руководство для определения Enterobacteriaceae пo методу НВЧ подсчетом колоний" в части порядка проведения исследований
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта |
Разд.2 | |
Разд.2 | |
Разд.2, 3.1.4, 3.2.7, 3.2.8 | |
Разд.2 | |
Разд.1 | |
Разд.1, 4.1.1 | |
4.1.3, 5.5, 5.7 | |
4.8.2 |
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта бактерий семейства Enterobacteriaceae и два метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и метод посева на поверхность селективно-диагностической среды.
Методы выявления и определения наиболее вероятного числа основаны на высеве продукта и (или) его разведений в жидкую селективную среду, инкубировании посевов при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч, пересеве выделенной культуры на поверхность селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам роста принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae.
Метод определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae посевом на поверхность агаризованной среды основан на высеве 0,1 или 0,2 см продукта или его разведений на поверхность селективно-диагностической среды, инкубировании посевов при (37±1) °С в течение 24 ч, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae.
Требования настоящего стандарта являются обязательными.
Отбор проб и подготовка их к испытанию - по ГОСТ 26668 и ГОСТ 26669.
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);
________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 (здесь и далее).
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта);
микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение в 900-1000;
поплавки (трубки Дархема);
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;
бриллиантовый зеленый;
генцианвиолет;
диметил--фенилендиамин;
желчь говяжья сухая или натуральная;
метиловый фиолетовый;
N,N,N',N'-тетраметил-пара-фенилендиамина дигидрохлорид;
индикаторные бумажки на оксидазу, выпускаются Дагестанским НПО "Питательные среды" и Горьковским НИИ эпидемиологии и микробиологии.
3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19 см
раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,1 моль/дм
и после растворения добавляют 80 см
дистиллированной воды. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.2. Раствор бриллиантового зеленого концентрацией 5 г/дм: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.3. Раствор генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм: 1 г одной из анилиновых красок переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
и доводят дистиллированной водой до метки.
3.1.4. Растворы и реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.
3.1.5. Растворы для определения оксидазы готовят непосредственно перед применением.
3.1.5.1. Раствор N,N,N',N'-тетраметил-пара-фенилендиамина дигидрохлорида концентрацией 10 г/дм: 1 г реактива переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
, растворяют в дистиллированной воде температурой 10-15 °С.
3.1.5.2. 30-40 мг -нафтола растворяют в 2,5 см
ректификованного этилового спирта, добавляют 7,5 см
дистиллированной воды и 40-60 мг диметил-n-фенилендиамина.