Профессиональные справочные системы
для специалистов строительной отрасли


ГОСТ 28566-90
(СТ СЭВ 6646-89)

     
Группа Н09

     

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Метод выявления и определения количества энтерококков

Food products. Method for detection and determination of count Enterococci



ОКСТУ 9109

Срок действия с 01.07.91
до 01.07.96*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу N 5-94 Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии  и сертификации
(ИУС N 11-12, 1994 год).  - Примечание "КОДЕКС".

     

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

РАЗРАБОТЧИКИ

В.И.Рогачев, д-р техн. наук; Б.И.Голод, канд. биол. наук; Р.А.Волкова

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 29.05.90 N 1332

3. Срок первой проверки - 1996 г.

Периодичность проверки - 5 лет

4. Стандарт соответствует стандарту СЭВ 6646-89

5. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер раздела, пункта

ГОСТ 4201-79

2

ГОСТ 10444.1-84

2; 3.1.11; 3.1.12; 3.2.1; 3.2.8; 3.2.9

ГОСТ 10444.3-85

4.9.1; 4.9.2

ГОСТ 10929-76

2

ГОСТ 24104-88

2

ГОСТ 26668-85

1

ГОСТ 26669-85

1; 4.1

ГОСТ 26670-85

3.1.4; 3.1.5; 4.2; 5.4



Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления и количественного определения энтерококков (Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium, Streptococcus avium, Streptococcus gallinarum).

Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведении в жидкую селективную среду или на поверхность плотной селективной среды, аэробном культивировании посевов при (37±1) °С в течение 24-48 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к энтерококкам, пересчете их количества на 1,0 г (см) продукта.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ


Отбор проб - по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию - по ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ


Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов)*;

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта)*;

________________     

* Письмом Росстандарта от 31.05.2021 г. N 2025-ОГ/03 разъясняется, что "в ГОСТ 28566-90 допущены опечатки в части указанных метрологических характеристик весов. Для взвешивания реактивов и питательных сред могут быть использованы весы II высокого класса точности, (ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания») с дискретностью 0,001 г, ценой поверочного деления 10 мг. Для взвешивания продукта могут быть использованы весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 1 кг II высокого класса точности, (ГОСТ OIML R 76-1-2011) с дискретностью 0,01 г, ценой поверочного деления 100 мг.

Дополнительные технические и метрологические характеристики, в том числе пределы допускаемой погрешности таких весов указываются производителями в описании типа". - Примечание изготовителя базы данных.

     


микроскоп световой биологический с увеличением в 900-1000 раз;

стерилизатор горячим воздухом;

термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;

холодильник бытовой;

водорода перекись по ГОСТ 10929;

желчь крупного рогатого скота или сухая желчь;

железо (III) - аммония гидроцитрат;

ферментативный гидролизат казеина;

канамицин сульфат во флаконах по 0,5 г - 500000 ЕД и 1 г - 1000000 ЕД, в ампулах по 5 и 10 см 5% раствора, содержащих 0,25 и 0,5 г препарата;

полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;

эскулин;

натрия гидрокарбонат (NаНСО) по ГОСТ 4201.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов

3.1.1. Раствор с объемной долей перекиси водорода 10%:

33,3 см перекиси водорода с содержанием основного вещества 30% (в случае если перекись водорода имеет другое содержание основного вещества, то делается пересчет) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят объем дистиллированной водой до метки.

3.1.2. Раствор с массовой долей НСl 5%: 11,5 см концентрированной соляной кислоты переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят объем дистиллированной водой до метки.

3.1.3. Раствор массовой концентрацией натрия гидроокиси 50 г/дм: 5 г натрия гидроокиси переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.4. Раствор 2-, 3-, 5-трифенилтетразолий хлорида (ТТХ) массовой концентрацией 10 г/дм: 1 г ТТХ переносят, смывая дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670. В темной плотно закрытой посуде раствор хранят при (4±2) °С не более 3 мес.

3.1.5. Раствор массовой концентрацией теллурита калия 20 г/дм: 2 г теллурита калия переносят, смывая дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.6. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм: 1,6 г бромтимолового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.1.7. Раствор массовой концентрацией кристаллического фиолетового 0,1 г/дм: 0,01 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.8. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 16 г/дм: 1,6 г бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.1.9. Раствор массовой концентрацией натрия азида 100 г/дм: 10 г натрия азида переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют при легком подогревании в дистиллированной воде и раствор доливают до метки. Раствор готовят под вытяжкой, так как пары натрия азида ядовиты.

3.1.10. Раствор массовой концентрацией канамицина сульфата 50 г/дм (50000000 ЕД) и 100 г/дм (100000000 ЕД): во флаконы с 0,5 г или 1 г препарата вносят 10 см стерильной дистиллированной воды, содержимое флаконов растворяют.

3.1.11. Молоко обезжиренное готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.12. Растворы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Азидно-глюкозный бульон

Основа среды: к 1 дм мясопептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 5,0 г пептона, 7,5 г глюкозы, 2,5 г натрия хлорида, составные части растворяют нагреванием. После этого охлаждают и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации при 25 °С он составлял (7,2±0,1). Затем основу среды стерилизуют текучим паром (при 100 °С) в течение 30 мин. К основе среды, охлажденной до 50 °С, добавляют 2,0 см натрия азида, приготовленного по п.3.1.9, и 2,0 см раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по п.3.1.8. Готовую среду не стерилизуют. Среду хранят в защищенном от света и высыхания виде при (4 ±2) °С не более 3 мес. Непосредственно перед использованием ее разливают по 5 см в стерильные пробирки.

3.2.2. Глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН 7,2 и 9,6: 5,0 г триптона или ферментативного казеинового гидролизата, 12,5 см дрожжевого экстракта, 1,0 г глюкозы добавляют к 1 дм дистиллированной воды. Смесь, периодически помешивая, подогревают до полного растворения всех составных частей, охлаждают и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,2±0,1) или (9,6±0,1).

Среду разливают по 5 см в пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин. Среду хранят при (4±2) °С не более 14 сут.

3.2.3. Солевой бульон

Основа среды - глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1) по п.3.2.2.

При приготовлении питательной среды в 1 дм основы среды растворяют на водяной бане 65,0 г натрия хлорида, разливают по 5 см в пробирки, стерилизуют при (121±1) °С в течение 15 мин.

Питательную среду можно готовить за одну операцию, тогда в процессе приготовления основы среды добавляют 65,0 г натрия хлорида. Среду хранят при (4±2) °С не более месяца.