ГОСТ 10444.9-88

Группа Н09

     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

     
Метод определения Clostridium perfringens

     
Food products. Method of determination of Clostridium perfringens

МКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 1990-01-01

     

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 25.08.88 N 3020

3. В стандарт введен международный стандарт ИСО 7937 (1985)

4. ВЗАМЕН ГОСТ 10444.9-75

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

6. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)

7. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения Clostridium perfringens.

Метод основан на выделении С. perfringens из колоний, полученных при глубинном посеве продукта, его разведения или культуральной жидкости в селективные среды. Принадлежность выделенных колоний к С. perfringens определяют по морфологическим и биохимическим свойствам. В зависимости от требований нормативно-технической документации подсчитывают количество или учитывают присутствие (отсутствие) С. perfringens в исследуемом продукте.

Метод предназначен для:

установления соответствия микробиологических показателей качества пищевого продукта требованиям нормативно-технической документации;

исследования продукта по санитарно-эпидемиологическим показаниям;

анализа микрофлоры посевов (культуральной жидкости), в которых обнаружены мезофильные анаэробные клостридии, при необходимости подтверждения присутствия в посевах С. perfringens.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

1.1. Отбор проб пищевых продуктов - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26809.

1.2. Подготовка проб пищевых продуктов к анализу по ГОСТ 26669.

Консервы проверяют на герметичность по ГОСТ 8756.18.

Полные консервы, нормальные по внешнему виду, перед испытанием термостатируют при 30-37 °С в таре вместимостью до 1 дм включительно не менее 5 сут, в таре вместимостью свыше 1 дм - не менее 7 сут.

Пищевые продукты, в которых нормируется допустимое количество С. perfringens, термостатированию не подлежат.

Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления гомогената продукта или исходного разведения - не менее (10,0±0,1) г (см).

Исходные разведения продуктов с массовой долей NaCI более 5% готовят с использованием пептонной воды; исходные разведения мясных, молочных продуктов и молока готовят с использованием физиологического раствора. Для приготовления последующих десятикратных разведений используют пептонно-солевой раствор. Пептонную воду и пептонно-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669, физиологический раствор - по ГОСТ 10444.1.

Из пробы пищевого продукта, в котором нормируется количество С. perfringens, или его исходного разведения готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством С. perfringens, указанном в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта. Культуральную жидкость разводят так, чтобы получить при высеве раздельные колонии.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.1. Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы, реактивы по ГОСТ 10444.1, а также аппаратуру, материалы, реактивы, указанные ниже:

________________     

Письмом Росстандарта от 21.05.2021 г. N 8027-ИК/03 разъясняется, что "В п.2.1 ГОСТ 10444.9-88 допущена опечатка". Для взвешивания могут быть использованы весы II высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с дискретностью не менее 0,001 г. - Примечание изготовителя базы данных.

анаэростат или другое оборудование, обеспечивающее анаэробные условия культивирования;

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 2 мг (для взвешивания реактивов);

_____________

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 20 мг (для взвешивания продукта);

_____________

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

микроскоп световой биологический с приспособлением для фазовоконтрастного микроскопирования;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

петлю бактериологическую;

термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;

кислоту 5-амино-2-нафтален сульфоновую;

галактозу;

квасцы железоаммонийные;

натрий сернистокислый;

натрий тиосульфит (NaSO безводный);

неомицина сульфат в таблетках по 0,25 г и 0,1 г;

неомицина сульфат во флаконах по 0,5 г (50000 ЕД);

полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250000 ЕД) и по 50 мг (500000 ЕД);

полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;

кислота сульфаниловая;

циклосерин в таблетках по 0,25 г;

феноловый красный, индикатор;

цинк - порошок по ГОСТ 3640;

цитрат аммонийного железа.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов

3.1.1. Раствор массовой концентрации неомицина сульфата 50 г/дм: во флакон с 0,5 г неомицина сульфата (для инъекций) доливают до 10 см стерильную дистиллированную воду.

При приготовлении раствора массовой концентрации неомицина сульфата 10 г/дм из таблеток: 2 таблетки по 0,25 г или 5 таблеток по 0,1 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную посуду вместимостью 50 см, смывая дистиллированной водой, объем доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.2. Раствор массовой концентрации полимиксина В сульфата 2,5 и 5 г/дм или полимиксина М сульфата 5 г/дм: во флакон с 25 мг или 50 мг полимиксина (для инъекций) вносят до 10 смстерильную дистиллированную воду, получая растворы массовых концентраций 2,5 и 5 г/дм.

3.1.3. Раствор массовой концентрации циклосерина 40 г/дм: 4 таблетки циклосерина по 0,25 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную посуду вместимостью 25 см, смывая дистиллированной водой, объем доводят до метки.

Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Агар триптозо-сульфит-циклосериновый: основу питательной среды готовят следующим образом: 15,0 г триптозы, 5,0 г ферментативного пептона, 25 см дрожжевого экстракта, 1,0 г безводного тиосульфита натрия, 1,0 г цитрата аммонийного железа, 20,0 г агара растворяют в 1 дм кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 7,6±0,1. Основу среды стерилизуют при температуре (121±1,0) °С в течение 20 мин и хранят при температуре (4±2) °С не более 14 сут.

К 100 см основы, расплавленной и охлажденной до 45-55 °С, добавляют непосредственно перед употреблением 1 см раствора массовой концентрацией циклосерина 40 г/дм.

Допускается при отсутствии триптозы заменять ее равным количеством ферментативного пептона.