МУК 4.2.3745-22

Методические указания

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ

1. РАЗРАБОТАНЫ: ФКУЗ "Ростовский-на-Дону противочумный институт" Роспотребнадзора (А.К.Носков, В.Д.Кругликов, О.С.Чемисова, Э.А.Москвитина, Е.В.Монахова, Н.Е.Гаевская, А.Б.Мазрухо, Н.А.Селянская, Л.П.Алексеева, О.А.Подойницына, А.С.Водопьянов, Д.А.Левченко, М.И.Ежова); ФКУЗ "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора (Е.С.Казакова, Н.А.Осина, И.Н.Шарова, А.С.Абдрашитова, Н.Е.Щербакова, С.А.Щербакова, В.В.Кутырев); ФКУЗ "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (В.П.Смелянский, И.Б.Захарова, Г.А.Ткаченко, М.В.Подшивалова); ФКУЗ "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (С.В.Балахонов, Л.В.Миронова, Л.Я.Урбанович, Ж.Ю.Хунхеева, А.С.Гладких, Е.А.Басов, А.С.Пономарева); ФКУЗ "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (В.Н.Савельев, И.В.Савельева); ФКУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора (А.А.Лопатин, С.М.Иванова, В.В.Иванников); ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (М.В.Зароченцев, В.В.Мордвинова, М.А.Ярославцева); ФБУН "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Роспотребнадзора (И.А.Дятлов, М.В.Храмов, Е.А.Тюрин, Л.В.Чекан, С.Ф.Бикетов, Е.В.Баранова, П.В.Соловьев, И.Ю.Щит); ФГБУ "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Минздрава России (Ю.В.Олефир, Л.В.Саяпина, В.А.Меркулов, В.П.Бондарев).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю.Поповой 12 мая 2022 г.

3. МУК 4.2.3745-22 введены взамен МУК 4.2.2218-07 "Лабораторная диагностика холеры", утвержденных руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 31.05.2007, с изменениями, внесенными МУК 4.2.2315-08 "Серологические методы в диагностике холеры", утвержденными руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.01.2008.

ВНЕСЕНО Изменение № 1, утвержденное 31.05.2024 N 4.2.4030-24

Изменение № 1 внесено изготовителем базы данных

I. Область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) определяют методы диагностических и профилактических исследований на выявление возбудителя холеры в соответствии с порядком организации и проведения лабораторной диагностики холеры, установленным санитарно-эпидемиологическими требованиями, а также методическими указаниями.

_______________

Глава XXV СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500) (далее - СанПиН 3.3686-21).

МУК 4.2.3746-22 "Организация и проведение лабораторной диагностики холеры в лабораториях различного уровня", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 12.05.2022 (далее - МУК 4.2.3746-22).

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы научно-исследовательскими и медицинскими организациями.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

II. Характеристика возбудителя холеры

2.1. Холера - острое инфекционное заболевание из группы особо опасных инфекционных болезней, характеризующееся диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя, водным, пищевым и контактно-бытовым путями распространения инфекции.

_______________

Код А00 - холера по Международной классификации болезней МКБ-10.

2.2. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы O1 серогруппы (биовара классического и биовара Эль Тор) и серогруппы O139.

_______________

Код A00.0 - холера, вызванная холерным вибрионом O1 классического биовара, по Международной классификации болезней МКБ-10.

Код A00.1 - холера, вызванная холерным вибрионом O1 биовара Эль Тор, по Международной классификации болезней МКБ-10.

Холерные вибрионы O1 и O139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают заболевания холерой и являются эпидемически значимыми (токсигенными). Эпидемически незначимые (нетоксигенные) холерные вибрионы не содержат гены ctxAB и tcpA-F; могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению. Холерные вибрионы, у которых отсутствуют гены ctxAB, но имеются tcpA-F, относят к нетоксигенным штаммам.

_______________

Пункт 1910 главы XXV СанПиН 3.3686-21.

2.3. Возбудитель холеры принадлежит к классу Gammaproteobacteria, порядку Vibrionales, семейству Vibrionaceae, роду Vibrio, виду Vibrio cholerae (рис.1).

Холерные вибрионы - грамотрицательные аспорогенные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки, варьирующие в размерах (1,5-3,0 мкм в длину и 0,2-0,6 мкм в ширину), с одним полярно расположенным жгутиком, который длиннее тела клетки в 2-3 раза и обусловливает выраженную подвижность V. cholerae. Являются факультативными анаэробами, хорошо растут на щелочных плотных и жидких питательных средах в присутствии 0,5-2,0%-го раствора хлорида натрия; могут размножаться при 0% и 3% NaCl. Оптимальные показатели роста: температура 35-37°С и рН среды 7,6-8,0; могут расти при температуре от 10°С до 42°С и рН среды 9,0-9,2.

2.4. Холерные вибрионы быстро размножаются, в 1%-й пептонной воде через 6-8 ч образуют на поверхности среды нежную пленку, которая через 24 ч становится более грубой, морщинистой. В мясопептонном бульоне (далее - МПБ) через 3-5 ч наблюдается легкое помутнение среды, через 24 ч - интенсивный рост с образованием рыхлой пленки на поверхности и осадка на дне. На поверхности плотного питательного агара через 10-12 ч можно видеть образование мелких (до 1 мм в диаметре) гладких (S-форм, англ. smooth), полупрозрачных, голубоватых с ровным краем колоний, которые через 18-24 ч инкубации увеличиваются в размере до 2-3 мм. Могут встречаться атипичные колонии - шероховатые (R-форма, англ. rough) и мукоидного типа (М-форма, англ. mucoid), представляющие собой измененные формы холерного вибриона. Редко встречаются пигментированные колонии (коричневые или светло-желтые).

Класс III. Gammaproteobacteria

Порядок XI. Vibrionales

Семейство I. Vibrionaceae

     Рисунок 1. Классификация вибрионов

_______________

Классификация вибрионов составлена по справочнику Берджи по бактериологической систематике (англ. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2ndEd., 2015).

Примечание. Представители родов Aeromonas, Plesiomonas и Enhydrobacter исключены из семейства Vibrionaceae: порядок XII. Aeromonadales, семейство I. Aeromonadoceae, род I. Aeromonas Stanier, 1943 (14 видов); порядок XIII. Enterobacteriales. семейство I. Enterobacteriaceae, род XXVII. Plesiomonas Habs, Schubert, 1962 (1 вид); порядок IX. Pseudomonadales, семейство III. Incertae Sedis? род 1. Enhydrobacter Staley. Irgens. Brenner. 1987 (1 вид).

2.5. Холерные вибрионы образуют индофенолоксидазу (тест дифференциации от представителей семейства Enterobacteriaceae), ферментируют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях до кислоты без газа (тест дифференциации от представителей семейства Pseudomonadaceae), декарбоксилируют лизин и орнитин, но не дигидролизуют аргинин (тесты дифференциации от Photobacterium spp., Salinivibrio spp., Aeromonas spp., Plesiomonas spp. и Enhydrobacter spp., входящих в другие семейства, а также от отдельных видов рода Vibrio). Холерные вибрионы расщепляют до кислоты без газа сахарозу, мальтозу, крахмал, маннит; не расщепляют арабинозу, лактозу, инозит, салицин, целлобиозу. Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты и образуют индол. Из-за наличия протеолитических ферментов разжижают желатину, фибрин, свернутый куриный белок, казеин и другие белки. Холерные вибрионы продуцируют нейраминидазу, лецитиназу, триглицероллипазу. Основные признаки, по которым проводится дифференциация вибрионов, приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

     Основные дифференциальные признаки рода Vibrio и некоторых других микроорганизмов