ГОСТ Р 57989-2017 Продукция пищевая специализированная. Методы выявления патогенных микроорганизмов на основе полимеразной цепной реакции

     7 Выделение ДНК из анализируемого материала (экстракция ДНК из анализируемых проб)

7.1 Экстракция ДНК из каждой анализируемой пробы проводится в присутствии ВКО, для контроля правильности (точности) этапов выделения и амплификации ДНК.

7.2 В качестве отрицательного контроля (ОК) этапа экстракции ДНК из культуральной жидкости используют стерильный образец питательной среды для обогащения анализируемого продукта, предварительно протестированный на отсутствие ДНК искомых патогенных бактерий; из проб нативных продуктов - стерильный изотонический раствор натрия хлористого или ФБР для десорбции бактерий. При наличии спорных или невалидных результатов ПЦР используют ОК этапа выделения из набора реагентов.

7.3 Для экстракции ДНК применяют коммерчески доступные комплекты реагентов на основе методов сорбции ДНК на силикагеле или преципитации ДНК в соответствии с инструкцией производителя при возможности их сочетания с комплектами реагентов для амплификационного этапа исследований. Экстракцию ДНК из культуральной жидкости, взвесей микроорганизмов и бульонных культур, подготовленных по 6.3, 6.4 и 6.5, проводят без дополнительной обработки.

Использование роботизированных систем для экстракции нуклеиновых кислот допускается при наличии указаний в инструкции к прилагаемым комплектам реагентов на возможность их применения при анализе пищевой продукции.

Не допускается применение упрощенных методик экстракции ДНК на основе термокоагуляции.

7.4 Допускается проводить экстракцию ДНК из проб нативных пищевых продуктов по 7.3. При повышенном содержании жиров перед экстракцией ДНК проводят дополнительную обработку пробы суспензией неполярных растворителей с водой для перевода содержащейся в пищевом продукте ДНК в водную фазу, в которой и производится дальнейшая очистка.