ГОСТ 33429-2015 Мясо и мясные продукты. Определение содержания молочной кислоты и лактатов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Переиздание)

     8 Подготовка к измерению

8.1 Приготовление градуировочных растворов

Для определения молочной кислоты и лактатов готовят градуировочные растворы молочной кислоты массовой концентрации 1,7 г/см (раствор 1), 0,85 г/см (раствор 2), 0,34 г/см (раствор 3), 0,17 г/см (раствор 4), 0,085 г/см (раствор 5).

Для приготовления раствора 1 взвешивают 2,0 г молочной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, добавляют 70-80 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Для приготовления раствора 2 градуированной пипеткой отбирают 10 см раствора 1 и разбавляют 10 смдистиллированной воды.

Раствор 3 готовят, отбирая градуированной пипеткой 10 см раствора 1, затем переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Для приготовления раствора 4 градуированной пипеткой отбирают 5 см раствора 1, переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Для приготовления раствора 5 градуированной пипеткой отбирают 10 см раствора 4 и разбавляют 10 смдистиллированной воды.

Растворы готовят перед использованием.

8.2 Приготовление растворов

8.2.1 Приготовление 2%-ного раствора трихлоруксусной кислоты

Взвешивают 2,0 г трихлоруксусной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор помещают в коническую колбу с притертой пробкой.

Готовый раствор хранят в колбах с притертыми пробками при комнатной температуре не более 1 мес.

8.2.2 Приготовление подвижной фазы хроматографической системы

В качестве подвижной фазы используют буферный раствор фосфорнокислого калия однозамещенного молярной концентрации c(KH)=0,1 моль/дм с pH=6,0 (фосфатный буфер).

Для приготовления фосфатного буфера взвешивают 13,6 г фосфорнокислого калия однозамещенного, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см и доводят объем до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают до полного растворения. С помощью градуированной стеклянной пипетки добавляют по каплям ортофосфорную кислоту, доводя pH до 6,0 ед. pH и контролируя pH-метром. Перед использованием раствор дегазируют на ультразвуковой бане в течение 10-15 мин.

Готовый раствор хранят в колбах с притертыми пробками при комнатной температуре не более недели.

8.3 Подготовка пробы

Пробу массой 10 г взвешивают с записью результата до второго десятичного знака, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 50 см. Добавляют 30 см 2%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и тщательно гомогенизируют. Гомогенат ставят на ультразвуковую баню при температуре 20°C на 15 мин. Затем центрифугируют 5 мин с центробежным ускорением 4000 g. Полученный супернатант пропускают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу вместимостью 2 см.