Статус документа
Статус документа

ГОСТ 24849-2014 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий (с Поправкой)

Приложение Б
(обязательное)

     
Постановка оксидазного теста


Для подтверждения наличия в пробе воды колиформных бактерий выполняют оксидазныи тест одним из способов:

Способ 1

В качестве реактива для оксидазного теста используют тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлорид.

Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями (7.1.1.2) с питательной среды переносят на кружок фильтровальной бумаги большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлоридом для определения оксидазнои активности (А.5, приложение А). Оксидазныи тест считают положительным, если в течение 1-4 мин появляется окрашивание колоний в фиолетово-коричневый цвет. В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий по 7.1.1 настоящего стандарта пересев колоний на подтверждающие среды проводят непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на кружке фильтровальной бумаги с реактивом. Время пересева не ограничено.

Способ 2

В качестве реактива для оксидазного теста используют диметил-п-фенилендиамин дигидрохлорид с -нафтолом.

Допускается использовать готовые к употреблению диски СИБ-оксидаза, соблюдая сроки хранения.

Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями (7.1.1.2) с питательной среды переносят на кружок фильтровальной бумаги несколько большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом диметил-п-фенилендиамин дигидрохлоридом для определения оксидазной активности (А.5, приложение А). Оксидазный тест считают положительным, если появляется окрашивание колоний в синий цвет.

После появления первых признаков положительного теста (окрашивание колоний в синий цвет), но не позднее чем через 4 мин, мембранный фильтр переносят обратно на питательную среду. В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий по 7.1.1.3 пересев колоний на подтверждающие среды проводят непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на питательной среде. Посев целесообразно проводить не сразу после определения оксидазной активности, а после выдерживания на питательной среде свыше 5 мин.

Способ 3

Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают 2-3 каплями одного из указанных выше реактивов для оксидазного теста. Если используют бумажные индикаторные системы промышленного производства, то их смачивают дистиллированной водой. С мембранных фильтров (7.1.1) отбирают по 3-4 изолированные колонии каждого типа из числа учтенных с использованием платиновой петли или стеклянной палочки (металлическая петля из нихрома дает ложноположительную реакцию при работе с реактивом тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлоридом) и наносят их штрихом на подготовленную фильтровальную бумагу. Оксидазный тест считают положительным, если в течение 1 мин появляется окрашивание в сине-фиолетовый цвет. Тест считают отрицательным, если цвет в месте нанесения культуры не изменяется.

При получении нечеткого результата следует пересеять колонии секторами на питательный агар (А.1, приложение А) для получения роста изолированных колоний и через 24 ч инкубации посевов провести повторное определение оксидазной активности.