ГОСТ 24849-2014 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий (с Поправкой)

     7 Проведение анализа

7.1 Определение колиформных бактерий и Е. coli

7.1.1 Определение колиформных бактерий ускоренным методом с использованием мембранной фильтрации

7.1.1.1 Проведение анализа

При анализе питьевой воды системы централизованного водоснабжения и подземных источников 1-го класса по ГОСТ 2761 анализируют 300 см воды, пропуская этот объем не менее чем через два мембранных фильтра.

При исследовании питьевой воды нецентрализованного водоснабжения и поверхностных источников водоснабжения анализируют не менее 100 см воды, пропуская ее не менее чем через три мембранных фильтра, например пробы воды 1,0, 10 и 100 см.

При фильтровании воды неизвестного качества целесообразно увеличивать количество фильтруемых объемов для получения изолированных колоний (например, выполняя посев по 1 см из 1-го и 2-го десятикратных разведений). При этом объем воды для посева выбран правильно, если на одном - двух мембранных фильтрах выросли изолированные колонии, среди которых не более 30 колоний относятся к числу колиформных бактерий.

Для фильтрования используют стерильные мембранные фильтры, подготовленные по 6.3. Отмеренные объемы воды фильтруют через мембранные фильтры с использованием аппарата для фильтрования и соблюдением процедуры по 6.4.

После фильтрования анализируемой воды мембранные фильтры размещают посевом вверх на одну из селективных дифференциальных питательных сред (например, на фуксин-сульфитную среду Эндо) (А.3, приложение А), разлитых в чашки Петри, добиваясь полного прилегания фильтров к среде без пузырьков воздуха. Вместо среды Эндо допускается использовать лактозный агар с тергитолом 7 (А.4, приложение А).

Примечание - Лактозный агар с тергитолом 7 допускается использовать только при исследовании воды, в которой фоновая посторонняя водная микрофлора не мешает росту изолированных колоний колиформных бактерий на фильтре.

На одну чашку допускается помещать несколько фильтров с условием, чтобы фильтры не соприкасались. Маркировку профильтрованного объема воды наносят под фильтром с наружной стороны дна чашки Петри.

Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 18-24 ч.

7.1.1.2 Учет результатов

После окончания инкубации посевов регистрируют в журнале испытаний отсутствие или наличие на мембранных фильтрах колоний микроорганизмов.

Учитывают в качестве лактозоположительных все выросшие на мембранных фильтрах характерные колонии независимо от их размера:

- на среде Эндо - с темно-красной окраской и металлическим блеском или без него, слизистые с красным центром и отпечатком на оборотной стороне фильтра;

- на среде с тергитолом 7 с желто-оранжевой, кирпично-красной окраской, иногда с ржаво-окрашенным центром, образующим желтую окраску в среде под мембраной (ГОСТ 31955.1).

Для подтверждения принадлежности колоний к колиформным бактериям проводят оксидазный тест одним из способов, указанных в приложении Б, с использованием реактива для оксидазного теста (А.5, приложение А). При этом исследованию подлежат только те мембранные фильтры, на которых выросло не более 30-50 изолированных характерных колоний.

При использовании способа 3 определения оксидазной активности проводят проверку всех (до 10) колоний или выборочно 3-4 колонии разной морфологии.

Если при выборочной проверке колоний каждого типа получают неодинаковые результаты, то число оксидазоотрицательных колоний рассчитывают по формуле (2), 7.1.1.4.

Выборочную проверку колоний не проводят, если оксидазный тест выполняют по способу 1 или 2. Оксидазную активность одновременно всех колоний на фильтре учитывают через 1-4 мин после контакта с реактивом, что исключает субъективную оценку результатов исследования.

Подсчитывают сумму (А) всех колоний лактозоположительных оксидазоотрицательных бактерий, подтвержденных как колиформные бактерии.

Результаты подсчета регистрируют в журнале испытаний.

7.1.1.3 С целью повышения надежности оценки эпидемической безопасности воды при отсутствии роста колиформных бактерий, но наличии роста лактозоотрицательных оксидазоотрицательных колоний разной морфологии - розовых, розовых с центром подтверждают принадлежность бактерий к семейству Enterobacteriaceae по ферментации глюкозы. Для этого на всех фильтрах подсчитывают число указанных колоний каждого типа отдельно и регистрируют в журнале испытаний. Проводят посев двух-трех колоний каждого типа в бактериологические пробирки на полужидкую среду с индикатором ВР и глюкозой (А.6, приложение А).

Пробирки с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре (36,0±2,0)°С в течение 4-5 ч.

По истечении 4-5 ч инкубации посевов проводят учет реакции ферментации глюкозы:

- отсутствие в пробирках кислоты и газа подтверждает отсутствие бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae;

- образование в пробирках кислоты и газа подтверждает принадлежность бактерий к семейству Enterobacteriaceae.

Если при выборочной проверке реакции ферментации глюкозы, проведенной на колониях каждого типа, получены неодинаковые результаты, то число подтвержденных колоний рассчитывают по формуле (2), 7.1.1.4.