ГОСТ Р ИСО 21571-2014 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Экстракция нуклеиновых кислот
А.2 Получение ДНК, применимой для ПЦР, методами экстракции ДНК на основе поливинилпирролидона (ПВП)
А.2.1 Основной метод на основе ПВП
А.2.1.1 Общие положения
Этот простой, быстрый и дешевый метод [19] пригоден для большой группы продуктов, особенно содержащих большие количества полифенольных соединений.
А.2.1.2 Статус валидации
Этот метод был проверен путем внутрилабораторных исследований и применяется для систематического выделения ДНК во многих лабораториях. Данный метод еще не оценивался путем официальных межлабораторных исследований.
А.2.1.3 Принцип
Метод включает стадию лизиса (термический лизис в присутствии додецилсульфата натрия и высокой концентрации ЭДТА) и последующее удаление из водной фазы, содержащей ДНК, загрязняющих примесей, например полифенольных молекул, полисахаридов, метаболитов и растворимых белков, с помощью ПВП в комбинации с ацетатом аммония. Последним этапом является осаждение ДНК этанолом, что концентрирует ДНК и очищает ее от солей (см. [19]-[23]).
А.2.1.4 Меры безопасности
Работы с органическими реактивами следует выполнять в вытяжном шкафу.
А.2.1.5 Реактивы
А.2.1.5.1 Этиловый спирт, 
, 96%-ный.
Следует хранить и использовать при температуре минус 20°С.
А.2.1.5.2 Изопропанол, 
.
А.2.1.5.3 Поливинилпирролидон (ПВП), молекулярная масса 360 кДа; характеристическая вязкость (значение К) = 80-100
.
_______________
SIGMA Р-5288 - пример подходящего реактива, имеющегося в продаже. Эта информация приводится для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает обязательность его применения. Могут использоваться эквивалентные реактивы, если их применение приводит к тем же результатам.
А.2.1.5.4 Ледяная уксусная кислота, 
.
А.2.1.5.5 Соляная кислота, HCI, 37%-ная.
А.2.1.5.6 Хлорид натрия, NaCI.
А.2.1.5.7 Трис(оксиметил) аминометан (Трис), 
.
А.2.1.5.8 Этилендиаминтетрауксусной кислоты двунатриевая соль (
), 
.
А.2.1.5.9 Додецилсульфат натрия (SDS), 
.
А.2.1.5.10 Ацетат аммония, 
.
А.2.1.5.11 Раствор этилового спирта, 
, 70%-ный.
Следует хранить и использовать при температуре минус 20°С.
А.2.1.5.12 Буфер для экстрагирования, рН = 8,0 ед., (Трис) = 0,2 моль/дм, (NaCI)=0,250 моль/дм
, (
) = 0,025 моль/дм, (SDS) = 50 г/дм
.
Доводят значение рН до 8,0 ед. рН, используя HCI или NaOH.
А.2.1.5.13 Раствор ацетата аммония, (
) = 7,5 моль/дм.
Растворяют в стерильной воде. При необходимости пропускают через фильтр с размером пор 0,22 мкм.