ГОСТ Р 54674-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления и определения Staphylococcus aureus (Переиздание)

     8 Проведение испытаний

8.1 Выявление S. aureus

8.1.1 Для выявления S. aureus анализируемую пробу продукта или ее эквивалентное разведение вносят в одну из жидких селективных сред: солевой или сахарный бульон (см. 7.3.2, 7.3.3).

Исходное разведение в количестве 1 см (0,1 г продукта) вносят в 10 см среды нормальной концентрации или исходное разведение в количестве 10 см (1 г продукта) - в 10 см среды двойной концентрации.

Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и жидкой селективной средой (см. 7.3.2, 7.3.3) нормальной концентрации 1:10, двойной концентрации 1:1.

При испытании продукта с большим содержанием хлористого натрия (NaCI) солевой бульон для посева не используют. Массовая концентрация хлористого натрия в посевах не должна быть более 6,5%-7,0%.

Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±2) ч. Если помутнения бульона нет, то инкубируют еще (24±2) ч.

В солевом или сахарном бульоне стафилококки растут со стабильным равномерным помутнением среды, формируя компактный, легко суспендируемый осадок.

8.1.2 Для получения изолированных колоний из каждой пробирки с посевами (см. 8.1.1) бактериологической петлей проводят высев штрихом по ГОСТ 26670 на поверхность чашек Петри с одной из агаризованных селективно-диагностических сред: Байрд-Паркер агар (см. 7.3.5), агаризованная среда с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном (см. 7.3.6), яично-желточный солевой агар (см. 7.3.8), яично-желточный азидный агар (см. 7.3.9).

При предполагаемом присутствии в анализируемой пробе продукта бактерий рода Proteus или сильно обсемененной пробы используют агаризованную среду Байрд-Паркер, содержащую сульфаметазин (см. 7.3.7).

Чашки Петри с посевами переворачивают вверх дном, помещают в термостат и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±2) ч. Предварительный учет результатов проводят через (24±2) ч, окончательный - через (48±2) ч.

8.1.3 После инкубирования проводят просмотр чашек Петри на присутствие типичных и (или) предполагаемых колоний.

На агаризованной среде Байрд-Паркера (см. 7.3.5) стафилококки после (48±2) ч инкубирования растут в виде черных или серых блестящих выпуклых колоний диаметром 1-1,5 мм (до 1-3 мм), окруженных зоной лецитиназной активности в виде просветления среды вокруг них, иногда с узкой белой кромкой. Через (24±2) ч инкубирования в прозрачной зоне может появиться узкое опалесцирующее кольцо, окружающее колонию.

На агаризованной среде с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном (см. 7.3.6) стафилококки растут в виде черных, серых и белых мелких колоний, окруженных зоной преципитации, указывающей на коагулазную активность.

На готовой питательной среде (см. 7.3.7) с сульфаметазином стафилококки растут в виде серо-черных, блестящих выпуклых колоний. Бактерии рода Proteus обычно не растут или дают слабый рост в виде коричнево-черных колоний без роения.

На яично-желточном солевом (см. 7.3.8) и яично-желточном-азидном агарах (см. 7.3.9) стафилококки растут в виде колоний белого и желтого (различных оттенков) цветов с образованием вокруг них зоны лецитиназной активности.

8.1.4 Отобранные типичные и (или) предполагаемые колонии отмечают на дне чашки Петри для выделения чистой культуры и проведения идентификации.

8.1.5 Приготовление чистой культуры

Из каждой отобранной колонии (см. 8.1.4) проводят пересев культуры в жидкую селективную среду (см. 7.3.2, 7.3.3) и на поверхность скошенного мясо-пептонного агара (см. 7.3.4) или ГРМ-агара (см. 7.3.10). Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±2) ч. Готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и по ним проверяют чистоту выделенной культуры.

8.2 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к S. aureus

8.2.1 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к S. aureus определяют по отношению к окраске по Граму и способности образовывать каталазу, ацетоин, коагулировать плазму крови кролика и ферментировать мальтозу в аэробных и маннит в анаэробных условиях.

8.2.2 Окраска по Граму

Из выявленных культур готовят мазки, окрашивают по Граму по ГОСТ 10444.1, ГОСТ ISO 7218, ГОСТ 30425 (см. 7.3.16) и микроскопируют.

При микроскопировании стафилококки - положительно окрашенные по Граму клетки шарообразной формы (кокки) диаметром 0,6-1,0 мкм, чаще собранные в гроздья.

8.2.3 Определение каталазы

Определение способности микроорганизмов образовывать каталазу проводят по ГОСТ 30425.

8.2.4 Определение способности коагулировать плазму крови кролика

Способность коагулировать плазму крови кролика определяют у положительно окрашенных по Граму клеток шарообразной формы, чаще собранных в гроздья и образующих каталазу.

Для определения этой способности микроорганизмов в стерильные пробирки (10х75 мм) разливают по 0,5 см разведенной плазмы крови кролика (см. 7.3.19) и вносят в них по петле каждой культуры (см. 8.1.5). В качестве контроля оставляют одну пробирку с разведенной плазмой и незасеянной культурой. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют при температуре (37±2)°С. Если через 6 ч коагуляции плазмы не произошло, то пробирки оставляют при температуре (30,0±1,0)°С на 24 ч или проводят учет результатов после инкубационного периода продолжительностью, установленной инструкцией по применению плазмы крови кролика.