Статус документа

ГОСТ Р 51196-2010 (ИСО 8069:2005) Молоко сухое. Определение содержания молочной кислоты и лактатов

8 Порядок проведения испытания

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Следует избегать загрязнения, особенно продуктами испарения тела.

8.1 Проверка качества реактивов

8.1.1 Проверку качества реактивов по нижеприведенной процедуре проводят:

- во всех случаях при приготовлении новой партии реактивов (включая 5.6-5.10);

- после хранения реактивов в холодильнике без использования в течение более двух недель;

- в случае повторного использования после истечения периода аналитической неактивности;

- в любых случаях, когда этого требуют иные условия применения и/или хранения реактивов.

8.1.2 Отбирают пипеткой 10 см раствора L-лактата лития (см. 5.11) в каждую из двух мерных колб с одной меткой на 100 см (см. 6.4). Отбирают пипеткой 10 см раствора D-лактата лития (см. 5.12) в каждую из двух других мерных колб с одной меткой на 100 см (см. 6.4).

Определяют содержание L-молочной кислоты и L-лактатов и D-молочной кислоты и D-лактатов в растворах в двух парах колб на 100 см, как это указано в 7.4.2, 7.4.3 и 8.2.

8.1.3 Концентрацию лактатов лития ; , мг/дм, рассчитывают по одной из следующих формул:

a) для раствора L-лактата:

; (1)

b) для раствора D-лактата:

, (2)

где - значение оптической плотности при 340 нм, рассчитанное в соответствии с 8.2.1 и 8.2.2;

341 - значение фактора, учитывающего молекулярную массу L-лактата лития (96,1) и конечный объем (2,24 см) в 9.1 при расчете концентрации L-лактата;

346 - значение фактора, учитывающего молекулярную массу D-лактата лития (96,1) и конечный объем (2,27 см) в 9.1 при расчете концентрации D-лактата.

8.1.4 Принимая во внимание чистоту L- и D-лактата лития, используемых для приготовления растворов, степень повторного нахождения (ПН) L- или D-лактата лития в любой из колб (см. 8.1.2) должна быть в диапазоне (100 ± 5)%. Если ПН не находится в данном диапазоне, осуществляют проверку реактивов, метода выполнения работы, точности пипеток и параметров спектрофотометра. Для проверки реактивов и оборудования могут быть использованы методы текущей проверки, применяемые в биохимическом анализе пищевых продуктов и опубликованные в специальной литературе [3]. Принимают требуемые меры для получения надлежащих результатов. Данную проверку качества реактивов повторяют, пока не будут получены удовлетворительные результаты.

Примечание - Степень повторного нахождения (ПН) - доля измеренного количества.

8.2 Определение

8.2.1 Необходимые количества компонентов инкубационной смеси вносят, используя соответствующую пипетку (см. 6.5), в кювету (см. 6.12) спектрофотометра (см. 6.11) в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 - Аналитическая схема ферментативного определения L- и D-молочных кислот (L- и D-лактатов)


Реактивы, дозируемые в кювету, см	Обозначение кювет
	Контрольная проба	Стандарт D-лактата лития	Стандарт L-лактата лития	Проба
Дистиллированная вода	1,000	-	-	-
Стандарт (см. 8.1.2)	-	1,000	1,000	-
Проба (см. 7.4.3)	-	-	-	1,000
Буферный раствор, pH 10 (см. 5.6)	1,000	1,000	1,000	1,000
Раствор НАД (см. 5.7)	0,200	0,200	0,200	0,200
ГПТ (см. 5.10)	0,020	0,020	0,020	0,020
L-ЛДГ (см. 5.8)	0,020	-	0,020	0,020
D-ЛДГ (см. 5.9)	0,050	0,050	-	0,050

Содержимое всех кювет перемешивают при помощи пластикового шпателя (см. 6.10) или закрывают кювету и переворачивают несколько раз. После перемешивания кюветы выдерживают 5 мин при комнатной температуре перед тем, как измерить оптическую плотность ( и ) инкубационной смеси во всех кюветах относительно воды при длине волны 340 нм.