ГОСТ Р 51196-2010 (ИСО 8069:2005) Молоко сухое. Определение содержания молочной кислоты и лактатов
5 Реактивы
Используют реактивы только установленной аналитической степени чистоты. Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной, полученной на стеклянном оборудовании, а вода, используемая для других целей, должна быть дистиллированной.
5.1 Раствор калия гексацианоферрата(II), (K
[Fe(CN)
]·3H
O)=35,9 г/дм
Растворяют в воде 35,9 г тригидрата калия гексацианоферрата(II). Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.
5.2 Раствор цинка сульфата, (ZnSO
·7H
O)=71,8 г/дм
Растворяют в воде 71,8 г гептагидрата сульфата цинка. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.
5.3 Растворы натрия гидроксида
5.3.1 Раствор I натрия гидроксида, (NaOH)=10 моль/дм
Растворяют в воде 400 г натрия гидроксида. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.
5.3.2 Раствор II натрия гидроксида, (NaOH)=0,1 моль/дм
Растворяют 4,0 г натрия гидроксида в воде. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.
5.4 Раствор глицерина (CH
O
), с объемной долей глицерина 50%.
5.5 Раствор аммония сульфата, [(NH
)
SO
]=3,2 моль/дм
Растворяют 422,84 г аммония сульфата в воде. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.
5.6 Буферный раствор, pH 10
Растворяют 7,92 г глицилглицина (CH
N
O
) и 1,47 г L-глутаминовой кислоты (C
H
NO
) в 80 см
воды. Устанавливают pH (10,0±0,1) при 20 °C раствором I гидроксида натрия (см. 5.3.1) и при постоянном перемешивании доводят объем раствора водой до 100 см
.
Раствор хранят не более 3 мес при температуре от 0 °C до 5 °C.
5.7 Раствор никотинамид-аденин-динуклеотида (НАД)
Растворяют 350 мг никотинамид-аденин-динуклеотида (CH
N
O
P
) в 10 см
воды.
Полученный раствор хранят в течение 1 мес при температуре от 0 °C до 5 °C. Во время использования сосуд с раствором должен быть погружен в емкость с дробленым льдом.
5.8 L-лактатдегидрогеназа (L-ЛДГ), из суспензии мышцы свиньи
10 мг суспензии L-лактатдегидрогеназы растворяют в 1 см раствора глицерина (5.4). pH полученной суспензии должен быть около 7. Если удельная активность L-ЛДГ менее 5500 ед./см
, проводят повторное приготовление раствора фермента согласно вышеприведенным указаниям.
Раствор L-ЛДГ стабилен в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.
5.9 D (D-ЛДГ) (из культуральной жидкости Lactobacillus leichmannii)
5 мг суспензии D-ЛДГ растворяют в 1 см раствора сульфата аммония (см. 5.5) pH полученной суспензии должен быть около 6. Удельная активность D-ЛДГ должна быть не менее 1500 ед./см
при 25 °C.
Если это не так, приготовляют другую суспензию D-ЛДГ.
Суспензия D-ЛДГ стабильна в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.