ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010 Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни

Приложение А
(обязательное)

     
Требования к бульону Mueller-Hinton

А.1 Общие положения

Добавки, помимо двухвалентных катионов или других дополнительных компонентов, не должны использоваться, если они не являются необходимыми для роста испытуемых организмов.

А.2 Испытания неприхотливых микроорганизмов в бульоне Mueller-Hinton

А.2.1 Общие положения

Стандартной средой для испытания неприхотливых микроорганизмов является бульон Mueller-Hinton. Оригинальная формула его приготовления следующая [10]:

обезвоженная вытяжка из 300 г мяса;

кислотный отвар казеина 17,5 г;

крахмал 1,5 г;

QSP дистиллированная вода 1000 мл;

рН 7,2-7,4.

А.2.2 Добавление и содержание катионов

Бульон должен содержать достаточную концентрацию катионов, чтобы обеспечить адекватный рост и чтобы позволить пользователю определить значение МПК для контроля качества штаммов в пределах, указанных в таблице 4.

Новые партии бульона Mueller-Hinton могут требовать определения приемлемого содержания катионов. Это исследование может быть выполнено с помощью индуктивно-сопряженной плазменной спектроскопии (ICP) пламенной атомно-абсорбционной спектрометрии (FAAS) [11].

Для добавления ионов кальция и магния готовят растворы 10 мг/л хлорида кальция (3,68 г CaCI·2HO в 100 мл деионизированной воды) и хлорида магния (8,36 г MgCI·6HO в 100 мл деионизированной воды), стерилизуют с помощью мембранного фильтра и хранят при температуре от 2 °С до 8 °С. Каждые 0,1 мл раствора катионов 10 мг/л, добавленные к 1 л бульона, повышают содержание катионов на 1 мг/л. Добавляют при помешивании при температуре от 2 °С до 8 °С.

Для большинства комбинаций антибактериальный агент-бактерия добавление кальция и магния до окончательной концентрации от 20 до 25 мг/л соответственно позволило получить правильные результаты контроля качества [12], [13].

Для daptomycin требуется окончательная концентрация ионов кальция в среде 50 мг/л [14].

Для агентов carbapenem - imipenem и meropenem - было показано, что окончательная концентрация цинка должна быть меньше 3 мг/л [15]. Массовая концентрация цинка, необходимая для максимальной активности других препаратов carbapenem, не была установлена, но возможно она должна быть на том же уровне.

А.2.3 Испытание родов Streptococcus

При испытании родов Streptococcus к содержащей катионы среде бульона Mueller-Hinton должна быть добавлена лизированная лошадиная кровь до окончательной концентрации от 2,5% до 5,0% . Кровь должна быть получена от заслуживающего доверия поставщика. Должна быть известна информация о гематокрите (не менее 30%). Для приготовления лизированной крови смешивают равные объемы дефибринированной крови и стерильной дистиллированной воды. Замораживают при температуре минус 20 °С и размораживают до окончательного лизирования клеток (может требоваться пять-семь циклов замораживания-оттаивания). Центрифугируют для просветления раствора. Полученный препарат лизированной крови является базовым раствором с объемной концентрацией 50%.

А.2.4 Дополнительные сообщения о средах

А.2.4.1 Общие положения

В настоящее время невозможно указать все возможности, которые появятся для контроля качества и референтного испытания антимикробной чувствительности аэробных и факультативно-аэробных бактериальных родов. Некоторые данные об эффектах сред содержатся в неопубликованных материалах. Новые агенты потребуют "стандартных" препаратов среды. Пользователи будут требовать подтверждения, что параметры стандартов контроля качества будут соответствовать и что новые издания будут доступны на международном уровне, так что настоящий стандарт может обновляться регулярно.

А.2.4.2 Sulphonamides и trimethoprim

Среда должна иметь массовую концентрацию тимидина менее чем 0,03 мг/л. Такая среда предотвращает использование для испытания других антимикробных средств.

A.2.4.3 Tigecycline

Tigecycline должен быть добавлен в бульон Mueller-Hinton в течение 12 ч приготовления бульона. Приготовленные планшеты для микроразведения могут быть заморожены.

А.2.4.4 Dalbavancin