ГОСТ Р 53761-2009 Молоко. Идентификация белкового состава электрофоретическим методом в полиакриламидном геле (Переиздание)

Отклонение

Возможные причины

Способы устранения

1 Полосы по краям геля расположены выше, чем в центре

Центральная часть геля нагревается сильнее краев

Центральный резервуар заполнить охлаждающим раствором

Избыточное напряжение

Охлаждающий раствор прокачивать при температуре (10-15)°С; уменьшить напряжение

2 Диффузия лидирующего красителя

Распад раствора белков пробы и/или растворов буферов

Приготовить растворы из свежих реактивов

Диффузия

Если полосы белка имеют такой же диффузный характер, как и полоса лидирующего красителя, увеличить силу тока на (25-50)%

3 Вертикальная исчерченность трека

Избыточная концентрация белков в пробе

Уменьшить концентрацию белков в пробе; уменьшить напряжение на 25%

4 Горизонтальная исчерченность трека

Неполное растворение белков

Полностью растворить пробу; центрифугировать

5 Широкие или размытые полосы или пятна белков

Диффузия в связи с медленной миграцией

Увеличить силу тока на 20%

Химические модификации ионными загрязнениями

Деионизовать раствор карбомида

Неполное обезжиривание пробы

Полностью удалить жир

6 Размывание полос в латеральном направлении

Диффузия растворов белков за пределы лунок до включения напряжения

Уменьшить время между внесением пробы и подачей напряжения

7 Искривленные полосы

Недостаточная полимеризация геля вокруг лунок

Дегазировать раствор мономеров геля;

увеличить концентрации аммония надсернокислого и N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамина на 25%

Наличие солей в пробе

Удалить соли диализом

Неровная поверхность геля

Проверить стадию взятия проб для приготовления геля, при необходимости заменить реактивы

8 Электрофорез занимает более 5 ч

Высокая концентрация электродного буфера

Проверить стадию приготовления электродного буфера (при необходимости разбавить буфер), проверить качество дистиллированной воды, заменить реактивы

Низкое напряжение

Увеличить напряжение на (25-50)%

9 Электрофорез идет слишком быстро с плохим разрешением

Буфер слишком разбавлен

Проверить стадию приготовления электродного буфера, проверить качество дистиллированной воды, заменить реактивы

Слишком высокое напряжение

Уменьшить напряжение на (25-50)%

10 Наблюдается несовпадение полос в контрольных пробах

Часть белка могла окислиться во время электрофореза или не была полностью восстановлена на стадии подготовки пробы

Приготовить свежие контрольные пробы; заменить реактивы