МУ 3.5.2435-09

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

3.5. ДЕЗИНФЕКТОЛОГИЯ

Методы изучения и оценки спороцидной активности дезинфицирующих и стерилизующих средств

     

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: ФГУН "НИИ дезинфектологии" Роспотребнадзора, кафедрой дезинфектологии ММА им. И.М.Сеченова (М.Г.Шандала, Н.Ф.Соколова, И.М.Абрамова, Л.С.Федорова, А.П.Степнов); Филиалом ФГУ 48 ЦНИИ МО России - Центром военно-технических проблем биологической защиты (В.В.Канищев); ВНИИ железнодорожной гигиены (В.А.Полякова); Испытательным лабораторным центром "Московский городской центр дезинфекции" (Ю.Г.Сучков, Р.Л.Гутерман); ФГУЗ "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (В.Н.Андрус); Роспотребнадзором (Л.С.Бойко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г.Онищенко 20 января 2009 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают общие требования к методологии и оценке спороцидной активности дезинфицирующих средств (ДС), стерилизующих средств (СС) и их субстанций (действующих веществ - ДВ), эффективности ДС при обеззараживании различных объектов внешней среды и СС при стерилизации изделий медицинского назначения.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы другими организациями.

1.3. Методические указания разработаны на основе Федерального закона "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" [1], Федерального закона "Об охране окружающей среды" [2], "Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании" [3], нормативно-методических документов, регламентирующих изучение и критерии оценки активности ДС, СС, а также активности их субстанций.

2. Общие положения

Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" [1] и Федеральный закон "Об охране окружающей среды" [2] регламентируют проведение специфической и неспецифической профилактики инфекционных заболеваний. В комплекс неспецифических профилактических мероприятий входят дезинфекция и стерилизация [4, 5] с использованием ДС и СС, обладающих спороцидной активностью, т.е. убивающих споры микроорганизмов при регламентированных параметрах технологии (режимах обработки) [6].

ДС, обладающие спороцидной активностью, необходимы для обеззараживания различных объектов при сибирской язве, газовой гангрене, столбняке, дезинфекции высокого уровня (ДВУ) эндоскопов; стерилизующие средства - для стерилизации изделий медицинского назначения (ИМН), включая эндоскопы, и для ДВУ эндоскопов [7-11].

Данные методические указания регламентируют методологию и технологию изучения и оценки спороцидной активности субстанций для производства ДС и СС, спороцидной активности и эффективности химических и физических ДС для обеззараживания различных объектов, а также СС для стерилизации ИМН, обсемененных наиболее устойчивыми микроорганизмами в споровой форме с учетом максимально возможного уровня контаминации ими объектов [10].

Исследования спороцидной активности субстанций, ДС, СС и эффективности режимов их применения включают:

выбор и подготовку тест-микроорганизмов в споровой форме для изучения спороцидной активности ДС, СС и их субстанций;

обеспечение стандартности условий проведения исследований спороцидной активности ДС, СС и их субстанций;

методы исследований и оценку результатов спороцидной активности ДС, СС и их субстанций in vitro (суспензионный метод, метод батистовых тест-объектов) и спектра спороцидной активности;

методы исследований и оценку спороцидной эффективности ДС при разработке режимов обеззараживания объектов внешней среды, контаминированных тест-микроорганизмами в споровой форме;

методы исследований спороцидной эффективности СС при разработке режимов стерилизации ИМН, включая эндоскопы;

методы исследований спороцидной активности СС, предназначенных для ДВУ эндоскопов.

Для применения спороцидных ДС в очагах искусственного происхождения (биотерроризм) разработанные режимы (дезинфектологические технологии) должны корректироваться в специальных лабораториях, изучающих возможные споровые биологические рецептуры и связанные с этим специфические особенности дезинфекции в очагах заражения.

Организации, проводящие исследования спороцидной активности и эффективности химических ДС, СС и их субстанций, в отчетной документации, представляемой для регистрации и сертификации средств, должны представлять конкретные результаты оценки стандартности использованных в исследованиях спор тест-микроорганизмов, а также эффективности нейтрализации ДВ использованного нейтрализатора.

3. Тест-микроорганизмы для изучения и оценки спороцидной активности ДС, СС и их субстанций

При изучении спороцидной активности ДС и их субстанций в качестве тест-микроорганизмов используют:

Bacillus cereus, шт. 96;

Bacillus subtilis, шт. 7;

сибиреязвенная живая сухая вакцина СТИ-1 для людей;

Bacillus anthracis, шт. 81/1 (рХ01, рХ02), или шт. 27 (рХ01, рХ02).

При изучении спороцидной активности СС и их субстанций в качестве тест-микроорганизмов используют:

Bacillus cereus, шт. 96;

Bacillus subtilis, шт. 7;

Bacillus licheniformis, шт. G BKM В-1711D;

Geobacillis stearothermophilis, шт. BKM B-718.

Тест-микроорганизмы выбирают в зависимости от действующего вещества (ДВ) и от назначения спороцидного ДС, СС и его субстанции.

3.1. Требования к тест-микроорганизмам

Тест-микроорганизмы должны иметь типичные морфологические, культуральные, биохимические свойства, присущие данному виду (прилож.1), и обладать стандартной устойчивостью к эталонным ДС и СС [10]: хлорамину 10%, перекиси водорода 6%, глутаровому альдегиду 2,5% (рН 7,2), сухому горячему воздуху при (160±3) °С, водяному текучему пару при 100 °С, водяному насыщенному пару под избыточным давлением при (121±1) °С.

Показатели устойчивости тест-микроорганизмов к вышеперечисленным средствам приведены в табл.1.

Таблица 1

Устойчивость спор тест-микроорганизмов к эталонным дезинфицирующим и стерилизующим средствам

Дальнейшие исследования проводят с использованием наиболее устойчивого к проверяемому ДС тест-микроорганизма.     

Музейные штаммы тест-микроорганизмов хранят в холодильнике при температуре (6±2) °С в виде сухой культуры в ампулах (после лиофильной сушки) не более двух лет [13].

Тест-микроорганизмы, не обладающие указанной устойчивостью, подлежат замене.

Спороцидную активность ДС, СС и их субстанций определяют, используя тест-микроорганизмы в споровой форме [12].

3.2. Методика приготовления суспензии спор тест-микроорганизмов

Для получения тест-микроорганизмов в споровой форме их выращивают на питательных средах, приведенных в табл.2.

Таблица 2

Питательные среды для выращивания тест-микроорганизмов в споровой форме

Перечень компонентов и методика приготовления питательных сред для культивирования тест-микроорганизмов, предназначенных для изучения и оценки спороцидной активности ДС, СС и их субстанций, приведены в прилож.2.

Процесс приготовления суспензии спор тест-микроорганизма, используемого при исследовании и оценке спороцидной активности ДС, СС и их субстанций, включает три последовательных этапа:

получение бульонной культуры из музейной лиофилизированной или агаровой культуры тест-микроорганизма;

получение споровой агаровой культуры тест-микроорганизма;

приготовление суспензии спор тест-микроорганизма и оценка соответствия ее требованиям.

При использовании лиофилизированной споровой культуры ампулы с этой культурой вскрывают в асептических условиях следующим образом: тампоном ваты, смоченным этиловым спиртом, обрабатывают поверхность ампулы, затем нагревают ее запаянный конец над пламенем. К накаленному концу ампулы прикладывают ватную пробку, смоченную стерильной водой, чтобы на ампуле образовалась трещина. Металлическим инструментом (скальпель, пинцет) откалывают по трещине конец ампулы. После этого стерильной пастеровской пипеткой в ампулу вливают 0,2 мл стерильной питьевой воды и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Для получения суспензии спор содержимое ампулы перемешивают с помощью стерильной бактериологической петли.

Полученную таким образом в ампуле суспензию спор тест-микроорганизма отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и переносят по 1-2 капли в две пробирки с 5 мл питательного бульона (бульон Хоттингера, сухой питательный бульон - СПБ, мясо-пептонный бульон - МПБ), содержащего 0,5% глюкозы.

При работе с возбудителем сибирской язвы для приготовления суспензии спор ампулы с высушенными культурами вскрывают в помещении музея (коллекции) живых культур. Манипуляции проводят в боксе биологической безопасности. При этом оттянутый конец ампулы нагревают над пламенем газовой горелки; затем влажным концом стерильного ватного тампона прикасаются к нагретой части, в результате чего появляются трещины. Конец ампулы накрывают трехслойной марлевой салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором и хорошо отжатой, и обламывают пинцетом.