ИНСТРУКЦИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАКТЕРИЦИДНЫХ СВОЙСТВ НОВЫХ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

УТВЕРЖДАЮ:

Зам. начальника Главного санэпид. управления Министерства здравоохранения СССР В.Попов 6 мая 1968 г. N 739-68

I. Общие положения

1. Химические вещества, применяемые для целей дезинфекции, должны отвечать следующим требованиям: обладать хорошей растворимостью в воде, вызывать гибель микроорганизмов в короткие сроки, не снижать свою активность в присутствии органических веществ, быть нетоксичными или мало токсичными для людей и животных, не иметь резкого неприятного запаха, не обладать маркостью и не портить обеззараживаемых предметов. Препараты не должны терять свои бактерицидные свойства при хранении как в сухом виде, так и в виде растворов, быть дешевы и удобны для транспортировки.

2. При изучении нового дезинфицирующего средства необходимо иметь подробную химическую характеристику препарата, с указанием физико-химических свойств, нейтрализующих веществ и условий хранения.

3. Определение бактерицидности испытуемых дезинфицирующих средств состоит из следующих этапов:

1) Подбор культур микроорганизмов для определения бактерицидной активности дезинфицирующих средств.

2) Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств в опытах с тест-объектами из батистовой ткани, зараженными тест-культурами.

3) Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств при обеззараживании поверхностей.

4) Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств при обеззараживании белья.

5) Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств при обеззараживании посуды.

6) Изучение бактерицидной активности дезинфицирующих средств при обеззараживании выделений человека (кал, моча, мокрота и др.).

II. Подбор культур микроорганизмов для определения бактерицидной активности новых дезинфицирующих средств

1. Микроорганизмы, используемые в качестве тест-культур и требования, предъявляемые к ним

4. Для определения бактерицидной активности нового дезинфицирующего средства используют следующие виды микроорганизмов:

а) кишечную палочку В. Coli, как наиболее устойчивый вид из кишечной группы бактерий;

б) золотистый стафилококк Staph. aureus, наиболее устойчивый вид из кокковой группы микробов;

в) антракоид Вас. anthracoides в споровой форме.

5. При выборе штаммов культур обращает внимание на наличие у них типичных морфологических, биохимических и культуральных свойств, а также на их устойчивость к действию фенола и хлорамина; споровую культуру антракоида проверяют на устойчивость к пару и хлорамину.

6. Рабочие штаммы должны иметь следующую устойчивость:

Устойчивость рабочих штаммов проверяют не реже 1 раза в месяц.

7. Музейные культуры хранят при Т°+4 °С в виде сухой культуры в ампулах (после лиофильной сушки) не более 2-х лет; в виде посевов на мясопептонном агаре (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5-3 мм) не более 6 месяцев.

8. При отсутствии резистентных культур их выделяют из внешней среды. Для выделения кишечной палочки готовят …..* взвеси путем смешивания 2-3 образцов фекалий с водопроводной водой (соотношение фекалий и воды 1:2). Затем …..* смешивают с 40 мл фенола, разведенного 1:90 и через 5-минутные интервалы делают посев (по 2 петли взвеси на поверхность среды Эндо). Через сутки типичные колонии кишечной палочки пересевают на поверхность МПА. Культуру, выросшую на МПА, идентифицируют по морфологическим, биохимическим и культуральным свойствам, затем проверяют ее устойчивость к фенолу и хлорамину.

________________

* Брак оригинала. - Примечание изготовителя базы данных.

Выделение штаммов золотистого стафилококка производят по такой же методике, только посев производят на МПА и материалом для выделения золотистого стафилококка служит смесь из 2-3 проб гнойного отделяемого ран, смешанных с фенолом в разведении 1:70.

I.* Приготовление бактериальной или споровой взвеси и батистовых тест-объектов

________________

* Нумерация соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

9. Суточную культуру рабочего штамма кишечной палочки или золотистого стафилококка засевают на поверхность мясопептонного агара и выращивают в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 часов.

10. Для получения споровой формы бактерий суточную бульонную культуру антракоида засевают на косой агар в пробирках (рецепт среды смотри в приложении 1). Пробирки в течение 48 часов (2 суток) держат в термостате при 37°, а затем 5-7 дней при комнатной температуре 10-18 °С, в темноте. По истечении указанных сроков культуру проверяют на спорообразование под микроскопом. Для приготовления мазка культуру забирают петлей с верхнего, среднего и нижнего участка агара; все три пробы растирают вместе на одном предметном стекле, распределяя тонким слоем. Мазок окрашивают фуксином. Под микроскопом рассматривают не менее 10 полей зрения; количество спор в поле зрения должно быть не менее 90%.

11. Для приготовления бактериальной взвеси культуру смывают стерильной водопроводной водой. Полученную взвесь микробов фильтруют через стерильный ватно-марлевый фильтр и разводят до концентрации, соответствующей по мутности бактериальному стандарту 2 миллиарда микробных тел в 1 мл.

Культуру антракоида снимают с агара и растирают о стенки пробирки со стерильной водопроводной водой.

12. При приготовлении батистовых тест-объектов кусок батиста погружают на 24 часа в холодную водопроводную воду для удаления аплитуры. Затем его тщательно стирают с мылом, кипятят, сушат и гладят горячим утюгом. С помощью иглы в приготовленном куске ткани выдергивают нитки в продольном направлении на расстоянии 11 мм друг от друга, а в поперечном - на расстоянии 6 мм. По этим линиям батист разрезают ножницами на тест-объекты и по 50 штук раскладывают в чашки Петри, последние завертывают в бумагу и стерилизуют в автоклаве 30 минут при 126° (0,5 ати).

13. Для заражения стерильные батистовые тест-объекты (в количестве 50-100 штук) в чашке Петри заливают 10-20 мл бактериальной или споровой взвесью, равномерно смачивая все тест-объекты. Чашку Петри закрывают крышкой и оставляют тесты в бактериальной или споровой взвеси в течение 20 минут. Затем в асептических условиях батистовые тест-объекты, пропитанные культурой, переносят на поверхность стерильной фильтровальной бумаги (2 слоя на дне чашки Петри), покрывают их сверху стерильной бумагой и закрывают чашку Петри крышкой. Через 10 минут после удаления избытка жидкости для фиксации микроорганизмов на батистовых тест-объектах, последние переносят на поверхность сухой стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри и сверху прикрывают стерильным листом фильтровальной бумаги, подсушивают в термостате при 37 °С в течение 20 минут с приоткрытыми крышками.

14. Хранят зараженные тест-объекты в чашках-Петри в рефрижераторе при температуре +4 °С.

Срок хранения тест-объектов, зараженных культурой кишечной палочки, 1 сутки, культурой золотистого стафилококка - 4 суток, спорами антракоида - 7 суток.

III. Определение устойчивости тест-культур

15. Определение устойчивости тест-культур проводят при воздействии дезинфицирующих растворов на тест-культуру, фиксированную на батистовых тест-объектах.

2. Определение устойчивости культур к действию фенола

16. Для определения устойчивости культур к фенолу используют чистый, кристаллический фенол, перегнанный при температуре 180°. Хранят кристаллический фенол в герметичной стеклянной таре, помещенной в эксикатор над обожженным хлористым кальцием.