МУК 4.2.1903-04

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных
источников (ГМИ) растительного происхождения
с применением биологического микрочипа

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: Институтом физиологии растений им. К.А.Тимирязева РАН и Институтом молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта РАН.

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 06.03.04.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

Настоящие методические указания распространяются на пищевое сырье (в т.ч. посевной и посадочный материал), пищевые продукты, цветы (далее - продукт) и устанавливает метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с использованием биологического микрочипа.

Метод основан на асимметричной мультиплексной полимеразной цепной реакции (далее - амПЦР) с последующей гибридизацией продуктов этой амПЦР на биологическом микрочипе. Метод одновременно устанавливает наличие или отсутствие в анализируемой пробе не менее пяти различных трансгенных последовательностей ДНК. Чувствительность метода - не менее 10 г (1 пг) ДНК.

Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации, осуществляющей контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, гигиеническую оценку и выдачу санитарно-эпидемиологических заключений в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья.

2. Нормативные ссылки

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие стандарты.

ГОСТ 12.1.004-91. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования.

ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности.

ГОСТ 12.1.019-79. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты.

ГОСТ 12.4.009-83. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание.

ГОСТ 12.4.021-75. Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования.

ГОСТ 1770-74. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия.

ГОСТ 3118-77. Кислота соляная. Технические условия.

ГОСТ 3164-78. Масло вазелиновое медицинское. Технические условия.

ГОСТ 4233-77. Натрий хлористый. Технические условия.

ГОСТ 4328-77. Натрия гидроокись. Технические условия.

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия.

ГОСТ 9284-75. Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия.

ГОСТ 9805-84. Спирт изопропиловый. Технические условия.

ГОСТ 12026-76. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия.

ГОСТ 12738-77. Колбы стеклянные с градуированной горловиной. Технические условия.

ГОСТ 13646-68. Термометры стеклянные ртутные для точных измерений. Технические условия.

ГОСТ 21400-75. Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний.

ГОСТ 24104-01. Весы лабораторные. Общие технические требования.

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.

ГОСТ 26678-85. Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Ч.1. Общие требования.

ГОСТ Р 51652-00. Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия.

3. Определения

В настоящих методических указаниях применяют следующие термины с соответствующими определениями.

3.1. Биологическая безопасность - в соответствии с прилож.А.

3.2. Генетически модифицированные источники - сырье и пищевые продукты (компоненты), используемые человеком в натуральном или переработанном виде, полученные из генетически модифицированных организмов или содержащие их в своем составе.

3.3. Генетически модифицированный организм - организм, генетический материал которого изменен с применением методов генной инженерии.

3.4. Генная инженерия - совокупность приемов, методов и технологий, в т.ч. технологий получения рекомбинантных нуклеиновых кислот, по выделению генов из организма, осуществлению манипуляций с генами и введению их в другие организмы.

3.5. Биологический микрочип - микроматрица с ячейками, в которых иммобилизован набор олигонуклеотидов.

3.6. Праймер - последовательность однотяжевой ДНК длиной до 25 нуклеотидов, применяемая для проведения асимметричной мультиплексной полимеразной цепной реакции.

3.7. Асимметричная мультиплексная полимеразная цепная реакция - полимеразная цепная реакция, где в одной пробирке с участием нескольких пар праймеров одновременно амплифицируются разные последовательности анализируемой ДНК, причем количество одного из праймеров каждой пары в несколько раз превышает количество другого праймера.

4. Аппаратура, материалы и реактивы

4.1. Компьютерная программа "Imageware" для анализа изображений, полученных с помощью "Чипдетектора-03" [1].

4.2. Комплекс аппаратно-программный для анализа флуоресценции биологических микрочипов типа "Чипдетектор-03" [2].

4.3. Амплификатор ДНК типа "Терцик" под микроцентрифужные пробирки вместимостью 0,2, 0,5 см со скоростью нагрева/охлаждения активного элемента не менее 1,5 °С/с [3].

4.4. Термостат суховоздушный типа ТВЗ-25 с рабочей температурой 37 °С, рабочий диапазон от 20 до 60 °С, точность поддержания температуры ±1 °С [4].

4.5. Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 высокого класса точности (условное обозначение II) с пределом допустимой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0001 г.

4.6. Камера морозильная по ГОСТ 26678, обеспечивающая температуру минус 20 °С.

4.7. Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

4.8. Микроцентрифуга настольная типа 5415С с частотой вращения не менее 13000 мин [5].

4.9. Мешалка магнитная с подогревом [6].

4.10. Аппарат для встряхивания типа CV-1500 с частотой вращения не менее 1500 мин [7].

4.11. рН-метр с набором электродов, с погрешностью измерений ±0,1 рН.

4.12. Микродозаторы с переменным объемом дозирования: 0,5-10,0 мм (шаг - 0,1 мм, точность ±2,5-10,0%, воспроизводимость 3-7%); 5,0-50,0 мм (шаг - 0,5 мм, точность ±2,0-5,0%, воспроизводимость 2,5-5%); 20,0-200,0 мм (шаг - 1,0 мм, точность ±1,5-2,0%, воспроизводимость 2-3%); 100-1000 мм (шаг - 5 мм, точность ±1,0-1,5%, воспроизводимость 1-2%).

4.13. Штативы под микроцентрифужные пробирки типа RP-30 и RP-80 на 30 и 80 шт. [8].

4.14. Наконечники с фильтром для микродозаторов (микропипеток) с переменным объемом дозирования жидкостей до 10; 20; 200; 1000 мм [9].

4.15. Пробирки микроцентрифужные типа Эппендорф вместимостью 0,2; 0,5 и 1,5 см стерильные.

4.16. Пестик или палочка стеклянные по ГОСТ 21400 для микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см.

4.17. Цилиндры стеклянные мерные лабораторные по ГОСТ 1770 на 25, 100, 250 и 1000 см.

4.18. Колбы стеклянные мерные плоскодонные конические по ГОСТ 25336 вместимостью 50-1000 см.

4.19. Пипетки стеклянные градуированные по ГОСТ 29227.

4.20. Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

4.21. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328.

4.22. Кислота соляная концентрированная по ГОСТ 3118, хч.

4.23. Натрий хлористый по ГОСТ 4233, хч.

4.24. Этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевая соль дигидрат (ЭДТА) [10].

4.25. Трис(оксиметил)аминометан [11].

4.26. Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, хч.

4.27. Спирт изопропиловый по ГОСТ 9805, хч.

4.28. Додецилсульфат натрия (SDS) [12].

4.29. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.30. Вода особо чистая стерильная, не содержащая ДНК, РНК и дезоксирибонуклеаз.

4.31. Фермент термостабильный Taq-полимераза, оптимум активности при 70-72 °С [13].