ГОСТ Р 51129-98

Группа Н59

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения лимонной кислоты

Fruit and vegetable juices. Method for determination of citric acid (citrate)

ОКС 67.080*

ОКСТУ 9109

_______________

* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г. ОКС 67.160.20. Здесь и далее.

- Примечание изготовителя базы данных.

Дата введения 1998-07-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

ВНЕСЕН Техническим комитетом ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. N 7

3 Разделы настоящего стандарта, за исключением 2; 5; 6; 8,2; 9, представляют собой аутентичный текст европейского стандарта ЕН 1137-94*. "Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение содержания лимонной кислоты (цитрата). Спектрофотометрическое определение никотинамидадениндинуклеотида (НАД)"

_______________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.     

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения лимонной кислоты в виде свободной кислоты или соли.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4529-78 Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

     3 Определения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая концентрация лимонной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ЦЛ - цитратлиаза ЕС 4.1.3.6 [1];

МДГ - малатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.37 [1];

ЛДГ - лактатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.27 [1];

НАД - никотинамидадениндинуклеотид, окисленная форма;

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;

Е - стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором при 25 °С для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.

     4 Сущность метода

Метод основан на ферментативном преобразовании иона цитрата в оксалоацетат с помощью ЦЛ, затем в пируват, восстановлении их с помощью НАДН в присутствии МДГ и ЛДГ, спектрофотометрическом измерении израсходованного НАДН, эквивалентного количеству лимонной кислоты.

В ходе анализа при активной кислотности 7,8 pH протекают следующие ферментативные реакции:

                                (1)

                            (2)

     
                           (3)

     5 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.

Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.

Иономер или pH-метр погрешностью измерения не более 0,05 pH.

Электрод для измерения pH стеклянный.

Электрод сравнения (каломельный).

Пипетка по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см.

Дозаторы пипеточные объемом доз 1, 0,2 и 0,02 см, относительной погрешностью дозирования ±1% [2]*.

_______________
     * См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

Цилиндр по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а., раствор концентрации ()=5 моль/дм.

Цинк хлористый по ГОСТ 4529, ч.д.а., раствор массовой концентрации ()=800 мг/дм.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 4201, ч.д.а.

Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769, ч.д.а., раствор концентрации ()=3,2 моль/дм.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652, раствор массовой концентрации ()=400 мг/дм.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Глицилглицин по НД [3].

НАДН (динатриевая соль) по НД [3].

Суспензия МДГ/ЛДГ по НД [3].

ЦЛ по НД [3].

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивы по качеству не ниже перечисленных в настоящем разделе.

     6 Отбор и подготовка проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка их к испытанию - по ГОСТ 26671.

6.1 Подготовка к анализу фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков

При высоком содержании лимонной кислоты в пробе продукта ее разводят водой до массовой концентрации лимонной кислоты от 20 до 40 мг/дм. Полученный раствор используют при проведении анализа. Сильно окрашенные соки подвергают большему разбавлению. Мутные соки перед разведением тщательно перемешивают.

6.2 Подготовка к испытанию концентратов фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков

Концентрат разводят водой до содержания сухих веществ по рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При необходимости пробу разводят повторно в соответствии с 6.1.

     7 Подготовка к испытанию

7.1 Приготовление буферного раствора активной кислотностью 7,8 pH

7,13 г глицилглицина растворяют в 70 см воды и доводят pH раствора до 7,8 с помощью приблизительно 13 см раствора гидроокиси натрия, затем приливают 10 см раствора хлористого цинка и объем доводят водой до 100 см. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С в течение четырех недель.

7.2 Приготовление раствора НАДН

30 мг динатриевой соли НАДН и 60 мг двууглекислого натрия растворяют в 6 см воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С в течение четырех недель.

7.3 Приготовление суспензии МДГ/ЛДГ

0,1 см суспензии МДГ, содержащей 5 мг лиофилизата МДГ в 1 см (6000 Е/см), 0,5 см суспензии ЛДГ, содержащей 5 мг лиофилизата ЛДГ в 1 см (2750 Е/см) смешивают с 0,4 см раствора сульфата аммония. Суспензия МДГ/ЛДГ в растворе сульфата аммония устойчива при 4 °С в течение 1 г .

7.4 Приготовление раствора ЦЛ

168 мг лиофилизата цитратлиазы растворяют в 1 см ледяной воды (1,25 Е/см). Раствор устойчив при 4 °С в течение одной недели, в замороженном состоянии - четырех недель.