ГОСТ 25179-90

Группа Н19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО

Методы определения белка

Milk. Methods for determination of protein

МКС 67.100.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 1991-01-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторским институтом молочной промышленности

РАЗРАБОТЧИКИ

О.А.Гераймович, канд. техн. наук; Е.А.Фитисов, канд. сельхоз. наук; Л.В.Андреевская

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 01.02.90 N 136

3. ВЗАМЕН ГОСТ 25179-82

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2009 г.

Настоящий стандарт распространяется на непастеризованное молоко с кислотностью не выше 20 °Т и устанавливает следующие методы измерения массовой доли белка: колориметрический, рефрактометрический и формольного титрования.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по ГОСТ 13928. Консервирование проб не допускается.

2. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

Колориметрический метод основан на способности белков молока при рН ниже изоэлектрической точки связывать кислый краситель, образуя с ним нерастворимый осадок, после удаления которого измеряют оптическую плотность исходного раствора красителя относительно полученного раствора, которая уменьшается пропорционально массовой доле белка.

2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104*.

_________________

* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001.

На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 53228-2008. - Примечание изготовителя базы данных.          

Центрифуга для измерения массовой доли жира молока по нормативно-технической документации.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный со светофильтром для выделения спектральной области 590 нм с кюветами рабочей длины 10 мм или спектрофотометр с выделяемой длиной волны 590 нм.

Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 2-3 ед. рН с ценой деления 0,05 ед. рН.

Термометр ртутный стеклянный с диапазоном измерения 0-100 °С, с ценой деления 0,5 или 1,0 °С, с пределом допустимой погрешности ±1 °С по ГОСТ 28498.

Пробки резиновые конусные N 16 или 19 по нормативно-технической документации.

Штатив для пробирок.

Фильтры бумажные.

Пробирки П1, П2, П4-25 по ГОСТ 25336.

Воронки В или ВФ по ГОСТ 25336.

Пипетки 1-2-1, 2-2-1, 4-2-1, 5-2-1, 2-2-20 по ГОСТ 29169.

Колбы 1-2-50, 1-2-200, 1-2-500, 1-2-2000, 2-2-50, 2-2-200, 2-2-500, 2-2-2000 по ГОСТ 1770.

Бутыль темного стекла вместимостью 2000 см по нормативно-технической документации.

Краситель "Амидо черный 10 Б" (1-амино-2,7-бис (-нитрофенилазо)-8-оксинафталин-3,6-дисульфокислоты динатриевая соль) по ТУ 6-09-05-557*, ч.д.а.

________________

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

2.2. Подготовка к измерениям

2.2.1. Приготовление буферного раствора

Взвешивают 31,70 г лимонной кислоты и 8,40 г ортофосфата натрия. Результат взвешивания записывают с округлением до 2-го десятичного знака. Реактивы помещают в колбу вместимостью 500 см и добавляют в нее 400 см воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 °С. Затем содержимое колбы перемешивают до полного растворения веществ и охлаждают до температуры (20±2) °С.

2.2.2. Приготовление раствора красителя

Навеску 4,60 г красителя, взвешенного с отсчетом до 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 500 см и добавляют в нее 200 см воды. Колбу нагревают до температуры не выше 70 °С и затем перемешивают содержимое ее до растворения красителя.

Раствор отфильтровывают через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 2000 см. Фильтр промывают водой до удаления следов красителя.

В эту же колбу переносят буферный раствор, приготовленный по п.2.2.1.

Содержимое колбы охлаждают до температуры (20±2) °С. Колбу доливают водой до метки, закрывают резиновой пробкой и перемешивают ее содержимое путем переворачивания колбы не менее шести раз.

Раствор должен иметь (2,3±0,1) ед. рН. Если рН раствора не соответствует данному значению, исправляют его добавлением концентрированной серной кислоты или гидроокиси натрия. Раствор, разбавленный в 50 раз, должен иметь оптическую плотность (0,82±0,02) на длине волны 590 нм в кювете с рабочей длиной 10 мм. Если оптическая плотность раствора не соответствует данному значению, то исправляют ее добавлением буферного раствора или раствора красителя.

Раствор следует использовать только после 12 ч выдержки.

Раствор должны хранить в холодильнике в бутыли из темного стекла не более 4 мес, еженедельно проверяя и исправляя значения рН и оптической плотности.

2.3. Проведение измерений

2.3.1. В стеклянную пробирку помещают пипеткой 1 см молока, приливают 20 см раствора красителя и, закрыв пробирку резиновой пробкой, перемешивают ее содержимое, переворачивая пробирку от 2 до 10 раз.

Следует избегать встряхивания, так как при этом образуется трудноразрушимая пена.

2.3.2. Помещают пробирку в центрифугу и центрифугируют при частоте вращения 25 с (1500 об/мин) в течение 10 мин или при частоте вращения 16 c (1000 об/мин) - в течение 20 мин.

2.3.3. Отбирают пипеткой 1 см надосадочной жидкости, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см, доливают колбу до метки водой и содержимое перемешивают. Аналогичным способом разбавляют рабочий раствор красителя в 50 раз.

2.3.4. Измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре оптическую плотность разбавленного раствора красителя по отношению к разбавленному содержимому мерной колбы.

2.3.5. После каждых 24 наблюдений кювету промывают буферным раствором, приготовленным по п.2.2.1.

2.4. Обработка результатов

2.4.1. Массовую долю белка , %, вычисляют по формуле

,

где - измеренная оптическая плотность, ед. оптич. плотности;

7,78 - эмпирический коэффициент, %/ед. оптич. плотности;

1,34 - эмпирический коэффициент, %.

2.4.2. Предел допустимой погрешности результата измерений в диапазоне массовой доли белка 2,5-4,0% составляет ±0,1% массовой доли белка при доверительной вероятности 0,80 и расхождении между двумя параллельными измерениями не более 0,013 единиц оптической плотности или не более 0,1% массовой доли белка.