ГОСТ 23454-79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ (с Изменениями N 1, 2, 3, 4)

3. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ С ИНДИКАТОРОМ МЕТИЛЕНОВЫМ ГОЛУБЫМ

3.1. Сущность метода

Метод основан на восстановлении метиленового голубого при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизмов вида Streptococcus thermophilus.

Чувствительность метода позволяет обнаружить пенициллин от 0,01 до 0,1 МЕ/см; стрептомицин от 30 до 50 мкг/см; тетрациклин; окситетрациклин - 1 МЕ/см; олеандомицин - 10 МЕ/см; массовую долю формалина более 0,003%; массовую долю перекиси водорода более 0,01%.

3.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Аппаратура - по п.2.2.1.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76, раствор массовой концентрацией 0,03 г/см.

Метиленовый голубой по нормативному документу, раствор массовой концентрацией 0,005 г/см.

Пенициллин (бензилпенициллина калиевая или натриевая соль) по ГФ СССР-X.

Молоко обезжиренное стерильное, приготовленное по ГОСТ 9225-84.

Тест-культура коллекционная (штамм Streptococcus thermophilus).

Вода питьевая по ГОСТ 2874-82*.

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88.

3.1, 3.2. (Измененная редакция, Изм. N 2).

3.3. Подготовка к анализу

3.3.1. Приготовление коллекционной и рабочей тест-культуры проводят в соответствии с пп.2.3.2 и 2.3.3.

3.3.2. Приготовление водного раствора пептона

3 г пептона помещают в колбу и доливают до 100 см водопроводной водой, стерилизуют при (121±2) °С в течение 10 мин и хранят в холодильнике при (6±2) °С в течение 30 сут. В случае отсутствия стерилизатора допускается кипячение раствора пептона от 1 до 2 мин на слабом огне; данный раствор должен быть использован в течение 7-8 ч.

3.3.3. Приготовление водного раствора метиленового голубого

500 г метиленового голубого помещают в колбу, доливают 100 см дистиллированной кипяченой воды, перемешивают до полного растворения, плотно укупоривают и хранят в холодильнике при (6±2) °С не более 30 сут.

3.3.4. Приготовление смеси для анализа

К 20 см водного раствора пептона добавляют 3,5 см односуточной культуры термофильного стрептококка (пипетку предварительно следует хорошо ополоснуть этой смесью) и 0,1 см водного раствора метиленового голубого. Смесь хорошо перемешивают. Смесь готовят перед анализом. Объем смеси зависит от числа исследуемых проб.

3.3.2, 3.3.3, 3.3.4 (Измененная редакция, Изм. N 2).

3.4. Проведение анализа

3.4.1. В чистые пробирки наливают по 10 см исследуемого молока и закрывают (неплотно) резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы хранят в холодильнике при (6±2) °С в течение суток.

Пробирки с исследуемым молоком нагревают в водяной бане до (87±2) °С с выдержкой 10 мин, затем охлаждают до (43±2) °С. После этого в пробирки вносят стерильной пипеткой по 2 см приготовленной смеси, перемешивают (пробирки трехкратно перевертывают) и выдерживают в водяной бане при температуре 41-42 °С в течение 2 ч.