Применение в качестве национального стандарта РФ прекращено
Профессиональное решение
для специалистов строительной отрасли


ГОСТ 30518-97/ГОСТ Р 50474-93

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

     
Методы выявления и определения количества бактерий группы
кишечных палочек (колиформных бактерий)

     
Food products. Methods for detection and quantity determination of coliformes



МКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 1994-01-01

     

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1 РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"

2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 11 от 23 апреля 1997 г.)

3 Настоящий стандарт соответствует ИСО 4831-78 "Микробиология. Общее руководство по подсчету колибактерий. Методика расчета наиболее вероятного значения после инкубации при 30 °С" и ИСО 4832-78 "Микробиология. Общее руководство по подсчету колиформ. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С" в части сущности методов

4 Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 г. N 122 ГОСТ 30518-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50474-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа
по стандартизации

Республика Беларусь

Госстандарт Республики Беларусь

Республика Казахстан

Госстандарт Республики Казахстан

Кыргызская Республика

Кыргызстандарт

Республика Молдова

Молдовастандарт

Российская Федерация

Госстандарт России

Республика Таджикистан

Таджикстандарт

Туркменистан

Главгосслужба "Туркменстандартлары"

Республика Узбекистан

Узгосстандарт



5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта

ГОСТ 9284-75

3.1

ГОСТ 10444.1-84

3.1, 5.3

ГОСТ 24104-88

3.1

ГОСТ 26668-85

2

ГОСТ 26669-85

2, 5.1.1

ГОСТ 26670-91

5.1.2, 5.5, 6.3, 6.4, 6.5

ГОСТ 30425-97

5.7



7 ПЕРЕИЗДАНИЕ


Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.

Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (KОЕ) колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см жидкого продукта более 150 KОЕ колиформных бактерий.

     1 Сущность методов


Методы выявления и определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок (колб), пересеве, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.

Методы определения количества колиформных бактерий посевом в (на) агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных колоний, подтверждении, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.

     2 Отбор и подготовка проб


Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.

     3 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

3.1 Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);

_____________

* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.

микроскоп световой биологический с увеличением 900-1000;

петля бактериологическая;

поплавки (трубки Дархема);

стекла предметные по ГОСТ 9284;

термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.

бриллиантовый зеленый;

генцианвиолет;

желчь говяжья сухая или натуральная;

метиловый фиолетовый;

феноловый красный.

3.2 Для проведения испытания применяют питательные среды:

агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным;

бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью;

бульон Мак-Конки;

бульон Кесслер;

среду Эндо.

     4 Подготовка к испытанию

4.1 Приготовление растворов

4.1.1 Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19 см раствора гидроокиси натрия (NaOH)=0,1 моль/дм и после растворения добавляют 80 см дистиллированной воды.

4.1.2 Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.3 Раствор генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм: 1 г одной из анилиновых красок переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.4 Раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм: 0,2 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.5 Растворы, приготовленные по 4.1.1-4.1.4, хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

4.1.6. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным: 3,0 г мясного экстракта, 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5,0 г хлористого натрия, 0,5 г фосфорнокислого двузамещенного калия, 15,0 г агара добавляют к 1000 см дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта допускается использовать вместо мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясопептонный бульон по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации она составляла при 25 °С (7,0±0,1). Среду стерилизуют в течение 20 мин при температуре (115±1) °С, затем охлаждают до 45-55° и прибавляют 40 см раствора фенолового красного, приготовленного по 4.1.4, и 2 см раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри, колбы или флаконы.

4.2.2 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью: 10,0 г пептона, 5,0 г лактозы, 6,45 г двузамещенного фосфорнокислого безводного натрия, 2,0 г однозамещенного фосфорнокислого безводного калия, 20,0 г сухой говяжьей желчи или 200 см натуральной желчи, 3 см раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, добавляют к 1000 см дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 800 см дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают рН таким образом, чтобы она составляла при 25 °С (7,2±0,1), после чего среду вновь доводят до кипения. Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают с соблюдением правил асептики по 10 см в стерильные пробирки с поплавками или по 100 см в колбы.

4.2.3 Бульон Мак-Конки: 20,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5,0 г хлористого натрия, 5,0 г сухой говяжей желчи или 50 см натуральной желчи, 1 см раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по 4.1.1, добавляют к 1000 см дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см дистиллированной воды), нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации она составляла при 25 °С (7,2±0,1). Среду разливают по 10 см в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см и стерилизуют 15 мин при температуре (121±1) °С.