Применение в качестве национального стандарта РФ прекращено
Профессиональные справочные системы
для специалистов строительной отрасли


ГОСТ 10444.2-94

Группа Н09

     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

     
Методы выявления и определения количества
Staphylococcus aureus

     
Food products. Methods for detection and quantity determination
of Staphylococcus aureus



МКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 1996-01-01

     

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"

ВНЕСЕН Госстандартом России

2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 6 от 21 октября 1994 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа по стандартизации

Азербайджанская Республика

Азгосстандарт

Республика Белоруссия

Госстандарт Белоруссии

Республика Армения

Армгосстандарт

Грузия

Грузстандарт

Республика Казахстан

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизская Республика

Киргизстандарт

Российская Федерация

Госстандарт России

Республика Молдова

Молдовастандарт

Республика Узбекистан

Узгосстандарт

Украина

Госстандарт Украины



3 Настоящий стандарт представляет собой полный аутентичный текст ИСО 6888-83 "Общее руководство по определению Staphylococcus aureus. Метод подсчета колоний" в части определения количества Staphylococcus aureus и содержит дополнительные требования, отвечающие потребности экономики страны

4 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 21 февраля 1995 г. N 76 ГОСТ 10444.2-94 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1996 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.2-75

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ


Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus (S. aureus) посевом: в жидкую селективную среду (с предварительным обогащением) и на агаризованные селективно-диагностические среды.

Метод выявления S. aureus посевом в жидкую селективную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см жидкого продукта менее 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) S. aureus.

Метод выявления S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см жидкого продукта более 15 КОЕ S. aureus.

Метод определения наиболее вероятного числа (НВЧ) посевом в жидкую селективную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 1500 или в 1 см жидкого продукта менее 150 КОЕ S. aureus.

Метод определения количества S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см жидкого продукта более 150 КОЕ S. aureus.

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ


В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

______________

* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности

3 СУЩНОСТЬ МЕТОДОВ


Методы выявления и определения НВЧ S. aureus посевом с предварительным обогащением основаны на высеве навески продукта и (или) разведении навески продукта в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных характерных колоний к S. aureus.

Методы выявления и определения количества S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве навески продукта или разведения навески продукта на агаризованную селективно-диагностическую среду, инкубировании посевов, подсчете количества характерных колоний (при определении количества S. aureus), подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных характерных колоний к S. aureus.

4 ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ


Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.

5 АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ


Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);

лупа с увеличением 5-10;

микроскоп световой биологический с увеличением 900-1000;

петля бактериологическая;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С;

дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК);

кальций хлористый;

сухая плазма кроличья;

толуидин синий "С";

трисаминометан.

6 ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

6.1 Приготовление растворов и реактивов

6.1.1 Физиологический раствор готовят по ГОСТ 10444.1.

6.1.2 Раствор лимоннокислого натрия концентрации 50 г/дм: 5,0 г лимоннокислого натрия переносят в колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки, разливают по колбам или пробиркам и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

6.1.3 Раствор хлористого кальция концентрации 1 г/дм: 0,1 г хлористого кальция переносят в колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.

6.1.4 Раствор с объемной долей перекиси водорода 3% готовят по ГОСТ 10444.1, п.4.33.

6.1.5 Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1, п.4.25.

6.1.6 Раствор толуидина синего "С" концентрации 10 г/дм: 1,0 г толуидина синего "С" переносят в колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде, доводят дистиллированной водой до метки.

6.1.7 Цитратная плазма крови кролика: свежеполученную в асептических условиях из сердца кровь кролика тщательно смешивают в соотношении 4:1 со стерильным раствором лимоннокислого натрия, приготовленного по п.6.1.2. Полученную смесь центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин или отстаивают на холоде, затем плазму отсасывают пипеткой и разводят ее из расчета 1 см плазмы на 4 см физиологического раствора. Разведенную плазму по 0,5 см разливают в стерильные пробирки.

6.2 Приготовление питательных сред

6.2.1 Байрд-Паркер агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.1.

6.2.2 Молочно-солевой агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.4.

6.2.3 Мясо-пептонный агар (бульон) готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.12.

6.2.4 Солевой или сахарный бульон: 6,0 г хлористого натрия или 1,0 г глюкозы растворяют в 100 см мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 6,9±0,1. Бульон разливают в колбы или пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.

6.2.5 Среду из сухого питательного агара готовят по прописи, указанной на этикетке.

6.2.6 Среда с ДНК: растворяют в 1000 см дистиллированной воды 6,1 трисаминометана и доводят по ГОСТ 10444.1 рН раствора до 9,0±0,1.

К раствору добавляют 0,3 г ДНК, 10,0 г хлористого натрия, 1,1 см раствора хлористого кальция концентрации 1 г/дм, 15,0 г агара, нагревают до полного расплавления агара. К охлажденной до 65-55 °С среде добавляют 9,2 см раствора толуидина синего, приготовленного по п.6.1.6, тщательно перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри. Допускается хранение среды при температуре (6±2) °С не более 7 сут.