ГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2)

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1. Определение общего количества бактерий в воде

Сущность метода заключается в определении в 1 см воды общего содержания мезофильных, мезотрофных аэробов и факультативных анаэробов, способных расти на питательном агаре данного состава при температуре (37±0,5) °С в течение (24±2) ч, образуя колонии, видимые при увеличении в 2-5 раз.

4.1.1. Питательный агар расплавляют в водяной бане и охлаждают до температуры (45±5) °С.

4.1.2. Стерильные чашки Петри раскладывают на столе и подписывают на крышках номер пробы, дату посева и объем посеянной воды.

4.1.3. Из каждой пробы должен быть сделан посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. При исследовании водопроводной воды засевают в каждую из двух чашек по 1 см.

4.1.4. С флаконов с пробой воды снимают бумажные колпачки, вынимают пробки, горлышки фламбируют, после чего воду тщательно перемешивают осторожным продуванием воздуха через стерильную пипетку.

4.1.5. Стерильной палочкой отбирают соответствующие объемы воды и вносят в стерильные чашки, слегка приоткрывая крышку.

4.1.6. Для посева 0,1 см и меньших объемов воды используют разведения анализируемой воды. Для этого в пробирку с 9 см стерильной воды, приготовленной по п.3.3.1, вносят 1 см анализируемой воды. При этом пипетка должна быть опущена ниже поверхности воды не более чем на 3 мм, чтобы избежать смывания бактерий с наружной стороны. Другой стерильной пипеткой продуванием воздуха тщательно перемешивают содержимое пробирки, отбирают из нее 1 см и переносят в чашку, что будет соответствовать посеву 0,1 см анализируемой воды. При необходимости посева меньших объемов воды этой же пипеткой переносят 1 см содержимого первой пробирки в следующую с 9 см стерильной воды. Посев 1 см из второй пробирки будет соответствовать посеву 0,01 см анализируемой воды и т.д.

4.1.7. После внесения воды в чашки Петри ее заливают 10-12 см остуженного питательного агара при фламбировании краев пробирки или бутылки, где он содержится.

Воду быстро смешивают с агаром, осторожно наклоняя или вращая чашку по поверхности стола. Необходимо избегать образования пузырьков воздуха, незалитых частей дна чашки, попадания среды на края и крышку чашки. После этого чашки оставляют на горизонтальной поверхности до застывания среды.

4.1.8. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном не более чем по 3-4 чашки вместе. Посевы выращивают при (37±0,5) °С в течение (24±2) ч.

4.1.9. Колонии, выросшие как на поверхности, так и в глубине агара, подсчитывают с помощью лупы с увеличением в 2-5 раз или прибора для счета колоний. Для этого чашку кладут вверх дном на черный фон. Для большей точности счета каждую подсчитанную колонию отмечают со стороны дна тушью или чернилами для стекла.

4.1.10. Оценивают только те разведения, при посеве которых на чашке выросло от 30 до 300 колоний. При посеве 1 см неразведенной пробы учитывают любые количества колоний, но не превышающие 300.

Если в чашке с наиболее высоким разведением выросло свыше 300 колоний и анализ нельзя повторить, то допускается подсчитывать колонии с помощью пластинки с сеткой и лупы при сильном боковом освещении. Подсчитывают не менее 20 квадратов площадью 1 см каждый в разных местах чашки, затем выводят среднеарифметическое число колоний на 1 см, значение которого умножают на площадь чашки в см, вычисленную по формуле

.

4.1.11. Результат подсчета колоний в каждой чашке выражают в количестве бактерий на 1 см анализируемой воды с учетом посеянного объема. За окончательное количество бактерий принимают среднеарифметическое результатов подсчета на двух параллельных чашках или разных разведений. Результаты округляют следующим образом:

если результат находится в пределах чисел от 1 до 100, то записывают те числа, которые получены; если результат находится в пределах чисел от 101 до 1000, то результат округляют до 10; если результат находится в пределах чисел от 1001 до 10000, то результат округляют до 100 и т. д.

4.1.12. Количество колоний учитывают, ориентируясь на одну чашку, в случаях: если на другой чашке при посеве из разведения выросло менее 20 колоний; при ползучем росте бактерий, распространившихся на всю поверхность чашки или значительные зоны, маскирующем рост других колоний; при количестве колоний свыше 300.

Счетную пластинку рекомендуется применять при подсчете количества колоний, когда на обеих чашках отмечен ползучий рост.

При этом просчитывают квадраты на свободных от сплошного роста местах чашки.

4.1.13. Окончательный результат вносят в протокол анализа или в журнал регистрации, где должны быть приведены сведения из сопроводительного документа к пробе воды. Кроме того, отмечают особые обстоятельства анализа (превышение срока хранения пробы, изменение температуры и времени инкубации посевов, применение заменителей при приготовлении питательных сред и прочие вынужденные отклонения).

4.2. Определение количества бактерий группы кишечных палочек

К бактериям группы кишечных палочек относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при (37±0,5) °С в течение 24-48 ч или сбраживающие глюкозу с образованием кислоты и газа при (37±0,5) °С в течение 24 ч и не обладающие оксидазной активностью.

Обнаружение в воде бактерий группы кишечных палочек следует рассматривать как показатель фекального загрязнения воды, а их количество позволяет судить о степени этого загрязнения.

Количество бактерий группы кишечных палочек определяют методом мембранных фильтров и бродильным методом.

Метод мембранных фильтров