ГОСТ 24849-81 Вода питьевая. Полевые методы санитарно-микробиологического анализа

 3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1. Подготовка лабораторной посуды и материалов

Посуду и материалы готовят к анализу в стационарной лаборатории в соответствии с требованиями ГОСТ 18963. Комплектуют лаборатории для полевых исследований стерильной посудой и материалами в стерильной упаковке.

При невозможности комплектования лаборатории материалами на весь объем исследований можно проводить мытье, подготовку к стерилизации, стерилизацию посуды на месте (либо в автоклаве при (126±2) °С 30 мин, либо в сушильном шкафу при (160±5) °С в течение 1 ч). В этих случаях обеззараживание бактериологического материала проводят в автоклаве при (126±2) °С 30 мин или кипячением в течение 30 мин.

Для стерилизации прибора для фильтрования, пинцета, батометра, обработки рабочего места перед анализом  применяют этиловый ректификованный спирт.

3.2. Приготовление сред и реактивов

3.2.1. Приготовление стерильной воды по - ГОСТ 18963-73.

3.2.2. Питательный агар готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке.

3.2.3. Полужидкую среду с глюкозой (лактозой) готовят из сухого препарата с индикатором ВР и глюкозой (лактозой) по способу, указанному на этикетке.

При приготовлении полужидкой среды с лактозой для определения бактерий - показателей свежего фекального загрязнения добавляют 0,05 г триптофана на 100 см готовой среды перед разливом ее в пробирки.

3.2.4. Среду Эндо (модификацию) готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. В готовую и охлажденную до 60-70 °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 см среды: 0,2 см 10%-ного спиртового раствора основного фуксина для повышения дифференцирующих свойств среды и 0,2 см 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты во избежание зарастания посевов споровыми аэробными бактериями. После тщательного перемешивания среду разливают в чашки.

Среда не должна содержать следов влаги на поверхности. Чашки со средой хранят в светоизолированных укладках (пеналах) или заворачивают в плотную стерильную бумагу, не пропускающую свет. Срок хранения - не более 7 дней в условиях, обеспечивающих неизменный внешний вид среды и ее стерильность.

Среду Эндо непосредственно перед испытанием готовят в эмалированной или стеклянной посуде с крышкой или ватной пробкой. Для этого в оснащении лаборатории необходимы стерильные чашки Петри, навески из сухого препарата и соответствующий объем дистиллированной воды. Навески сухого препарата должны быть предохранены от влаги и света.

3.2.5. Приготовление двууглеводной среды Эндо для ускоренного метода определения БГКП

На 100 см дистиллированной воды помимо сухого препарата вносят 1 г сорбита. После приготовления среды по способу, указанному на этикетке, допускается прибавить на 100 см среды 0,2 см 10%-ного спиртового раствора основного фуксина, 0,4 см 50%-ного водного раствора фенола и 1,5 см 96%-ного этилового ректификованного спирта.

3.2.6. Приготовление реактива для определения оксидазной активности бактерий

1-й - 1%-ный спиртовой раствор -нафтола;

2-й - 1%-ный водный раствор диметил--фенилендиамина солянокислого или другого фенилендиаминового соединения.

Растворы хранят в темных флаконах с притертыми пробками:

1-й - до одного месяца, 2-й - до одной недели.

Перед употреблением к трем частям 1-го раствора добавляют семь частей 2-го раствора.

3.2.7. Приготовление тетразолово-розоловой среды (ТРС) и питательных подкладок

100 см мясопептонного бульона, 2 г лактозы, 0,25 г сухого питательного агара расплавляют при нагревании, стерилизуют при 112 °С 12 мин. Перед приготовлением подкладок в среду вносят 10 см 2%-ного водного раствора 2-, 3-, 5-трифенилтетразолий хлорида (ТТХ), 2 см 0,01%-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Средой пропитывают стерильные подкладки, вырезанные в виде дисков, размером, несколько большим диаметра мембранного фильтра, из асбестовых фильтров типа Зейтца (Ф) или 6-8 слоев листовой фильтровальной бумаги.

Подкладки, залитые средой, пропитывают при осторожном нагревании до температуры не выше 60 °С на водяной бане в течение 3 ч. Затем подкладки высушивают при 45-50 °С в сушильном шкафу. Хранят в темноте в стерильных упаковках. Цвет подкладок должен быть соломенно-желтым.

3.2.8. Приготовление среды КОДА

Среду нормальной концентрации готовят по способу, указанному на этикетке, и разливают в пробирки по 9 см. Среду удвоенной концентрации готовят, увеличивая количество сухого препарата в два раза на тот же объем воды, и разливают по 10, 50, 100 см во флаконы - в зависимости от выбранной схемы посева.

3.2.9. Приготовление реактивных полосок для определения образования индола

Реактивом, состоящим из 4 г пара-диметиламинобензальдегида, 50 см 96%-ного этилового спирта, 50 см ортофосфорной кислоты (очищенной концентрированной), смачивают полоски из фильтровальной бумаги на 1/3 их длины. Высушенные реактивные полоски можно сохранять в банке из темного стекла с притертой пробкой или в плотных пакетах из черной бумаги. Чувствительность полосок увеличится, если этиловый спирт заменить на амиловый или изоамиловый.

Цвет обработанного реактивом конца бумажки должен быть желтый.