ГОСТ 24849-81 Вода питьевая. Полевые методы санитарно-микробиологического анализа

 4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1. Выполнение полного анализа в передвижной лаборатории, монтируемой на специальных транспортных средствах (железнодорожных вагонах, автомобилях, судах и т.п.)

4.1.1. Определение числа сапрофитных микроорганизмов

К сапрофитным микроорганизмам относят мезофильных аэробных и факультативных анаэробов,  способных расти на питательном агаре данного состава при температуре (37±2) °С в течение 24 ч, образуя колонии, видимые при увеличении в 2 раза.

4.1.1.1. Подготовка к анализу

Из каждой пробы делают посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 20 до 300 колоний, при этом ориентируются на результаты предыдущих исследований.

При исследовании питьевой воды из системы централизованного водоснабжения в каждую из двух чашек вносят по 1 см пробы без разбавления.

При исследовании воды неизвестной степени микробного загрязнения проводят посев 1 см и по 1 см из первого и второго десятикратных разбавлений.

4.1.1.2. Проведение анализа

После тщательного перемешивания пробы приготовляют разбавления и немедленно вносят по 1 см воды из пробы или соответствующих разбавлений в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу же после внесения воды в каждую чашку вливают небольшое количество (5-6 см на чашку диаметром 95 мм) расплавленного и остуженного до 45-48 °С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он находился. Содержимое чашки быстро смешивают, равномерно распределяя его по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту операцию проводят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

Не допускается применять посев разбавлений, приготовленных заранее.

Чашки с посевами инкубируют вверх дном в термостате при температуре (37±2) °С в течение 24 ч.

4.1.1.3. Обработка результатов

Колонии подсчитывают только на чашках с числом изолированных колоний от 20 до 300. При посеве пробы без разбавления ведут подсчет на чашках с любым количеством колоний, меньшим 300. Должны быть подсчитаны все выросшие на чашке колонии,  видимые при увеличении в 2 раза.

Число подсчитанных на каждой чашке колоний делят на объем воды в см, засеянный на ту чашку, на которой велся подсчет, и результат выражают в количестве колоний в 1 см исследуемой воды. Вычисляют среднеарифметическое число колоний для всех чашек.

Окончательный результат округляют до двух-трех значащих цифр.

Результат можно представить на основании подсчета колоний на одной чашке, если на других чашках подвижный рост распространился на всю поверхность чашки или число колоний превышает 300-500.

Если на всех чашках наблюдается рост подвижных бактерий, не распространившийся на всю поверхность чашки, или в результате неудачной схемы посева в чашках с наиболее высоким разбавлением выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, допустимо вести подсчет с помощью счетной пластинки, разделенной на квадраты, или трафарета, делящего чашку на сектора. Подсчитывают не менее 1/4 площади чашки в разных местах с последующим пересчетом на всю площадь чашки.

Если рост подвижных бактерий распространился на всю поверхность чашки, в протоколе анализа отмечают ползучий рост.

4.1.2. Определение числа бактерий группы кишечных палочек

К бактериям группы кишечных палочек относят: грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при (37±2) °С в течение 5-24 ч и с отрицательным оксидазным тестом.

При необходимости экстренного предварительного ответа бактерии группы кишечных палочек характеризуют по способности к ферментации лактозы до кислоты или кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 16-18 ч.

4.1.2.1. Подготовка к анализу

При исследовании питьевой воды из системы централизованного водоснабжения анализируют 333 см, профильтровывая этот объем не менее чем через два фильтра.

При исследовании питьевой воды децентрализованного водоснабжения анализируют не менее 100 см воды. Каждую пробу воды профильтровывают не менее чем через три фильтра (например, можно фильтровать по 100, 10 и 1 см).

При исследовании воды неизвестной степени бактериологического загрязнения профильтровывают не менее четырех десятикратных объемов воды как централизованного, так и децентрализованного водоснабжения. Объемы воды для посева выбраны правильно, если на одном-двух фильтрах выросли изолированные колонии, среди которых не более 30 колоний относятся к бактериям группы кишечных палочек.

4.1.2.2. Проведение анализа

Для фильтрования используют мембранные фильтры со средним диаметром пор 0,5 мкм. Сухие стерильные мембранные фильтры, заранее обработанные в стационарной лаборатории, перед фильтрованием смачивают в стерильной дистиллированной воде.

Фильтрование воды проводят по ГОСТ 18963.