ГОСТ Р 54905-2012

Группа С09

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

Методы определения ферментативной активности -глюканазы

Enzyme preparations. Methods of -glucanase enzyme activity determination

ОКС 07.100.30,

         65.120

Дата введения 2013-06-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ"), Научно-техническим центром "Лекарства и биотехнология" (НТЦ "Лекбиотех")

2 ВНЕСЕН техническим комитетом по стандартизации ТК 454 "Охрана жизни, здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов"

3 УТВЕРЖДЕН приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2012 г. N 72-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 12, 2019 год

Поправка внесена изготовителем базы данных

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на ферментные препараты и устанавливает:

- метод определения ферментативной активности -глюканазы с использованием в качестве субстрата -глюкана с ДНС-реактивом;

- метод определения ферментативной активности -глюканазы по Шомоди-Нельсону.

Установленные в настоящем стандарте методы могут быть также использованы для определения активности -глюканазы в ферментсодержащих смесях, в т.ч. кормовых смесях, и кормах.

Примечание - -глюканазную активность исследуемых ферментных препаратов обеспечивают ферменты -глюканазы эндо- и экзо-действия.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 53046-2008 Препараты ферментные. Методы определения ферментативной активности целлюлазы

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53973-2010 Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения Бета-глюканазной активности

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 3765-78 Реактивы. Аммоний молибденовокислый. Технические условия

ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5845-79 Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия

ГОСТ 6038-79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначение чистоты

ГОСТ 20264.0-74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 53046, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 -глюкан: Высокомолекулярное соединение, полимер глюкозы, в котором остатки глюкозы соединены 1,4--гликозидными связями; с водой образует коллоидные растворы.

3.2 -глюканаза: Фермент, катализирующий гидролитическое расщепление цепей полимеров глюкозы - целлюлоз и гемицеллюлоз (-глюканов) с образованием свободных остатков глюкозы и олигосахаридов.

Примечание - К -глюканазам экзо-действия относят экзо-1,4-глюкан-4-глюкогидролазу КФ 3.2.1.74 [1], катализирующую гидролитическое расщепление -1,4 связи цепей целлюлоз и гемицеллюлоз (-глюканов) со стороны концов, содержащих нередуцирующие остатки глюкозы, с отщеплением свободной глюкозы.

     4 Метод определения ферментативной активности -глюканазы с ДНС-реактивом

4.1 Сущность метода

4.1.1 Метод основан на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих) сахаров, образующихся при действии -глюканазы на -1,4 связи -глюкана при определении в стандартных условиях.

4.1.2 Сущность метода заключается в восстановлении 3,5-динитросалициловой кислоты (ДНС) до З-амино-5-нитросалициловой кислоты, обладающей красно-оранжевой окраской, интенсивность которой определяют колориметрически при длине волны 540 нм.

4.1.3 За единицу -глюканазной активности (1 ед. -ГлА) принимают количество фермента, действующее на -глюкан с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в пересчете на глюкозу), образующихся за одну минуту при стандартных условиях: температуре 50 °С; 4,7 ед. рН; продолжительности гидролиза 10 мин.

4.1.4 Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции, определяют колориметрическим методом с ДНС-реактивом и рассчитывают по градуировочному графику, построенному для глюкозы [2]-[3].

4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

4.2.1 При определении ферментативной активности -глюканазы применяют следующие средства измерений и вспомогательное оборудование:

- фотоэлектроколориметр или спектрофотометр любого типа, который обеспечивает измерения при длине световой волны 540 нм с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более ±1% (не более 0,01 единицы оптической плотности);

- весы по ГОСТ Р 53228 с действительной ценой деления шкалы не более 0,1 мг;

- рН-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 ед. рН с пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±0,1 ед. рН;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный или механическую мельницу, обеспечивающую размалывание анализируемой пробы ферментного препарата до полного ее прохода через сито;

- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- ультратермостат с точностью регулирования температуры ±1 °С;

- центрифугу лабораторную любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 7000 мин;

- баню водяную любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100±1) °С;

- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью ±1,5 с;

- сито с размером диаметра ячеек 150 мкм.

(Поправка. ИУС N 12-2019).

4.2.2 При определении ферментативной активности -глюканазы используют следующие лабораторную посуду и материалы:

- колбы мерные стеклянные 1(2)-100-2, 1(2)-500-2, 1(2)-1000-2, 1(2)-2000-2 по ГОСТ 1770;

- цилиндры 1-50-1, 1-100-1, 1-500-1 по ГОСТ 1770;

- посуду лабораторную по ГОСТ 25336:

воронки ВФ 1(2)-75-ПОР 500 ТХС,

пробирки П 1-14-120 ХС или П 1-16-150 ХС,