• Текст документа
  • Статус
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


МУК 4.2.1955-05

     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод выявления и определения бактерий рода
Salmonella и Listeria monocytogenes на основе
гибридизационного ДНК-РНК анализа

Дата введения: с момента утверждения


1. РАЗРАБОТАНЫ: ГУ научно-исследовательский институт питания РАМН (В.А.Тутельян - руководитель, С.А.Шевелева, Н.Р.Ефимочкина, А.М.Григорьев, И.Б.Быкова, И.М.Нитяга); ГУ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (В.Г.Нестеренко); Центром госсанэпиднадзора в г.Москве (Н.Я.Салова, З.Г.Малышева); при участии Санкт-Петербургского ГУ "Центр контроля качества товаров (продукции), работ и услуг" (Н.И.Лебедева, Л.Б.Гамова, М.С.Колосова) и фирмы ООО "Ниармедик плюс" (С.В.Юров, Т.Б.Макарова, Д.О.Газдиев, А.Б.Швецов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 22 февраля 2005 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко.

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН временных методических указаний МУК 4.2.1840-04 "Метод экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes в пищевых продуктах и продовольственном сырье за 24 часа с использованием твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-рРНК анализа", утвержденных 29.02.04.

ВНЕСЕНО Дополнение N 1, утвержденное и введенное в действие Главным государственным санитарным врачом РФ c 06.12.2010

Дополнение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011 год


1. Введение


Проведение контроля пищевых продуктов и продовольственного сырья традиционными методами микробиологического анализа на наличие патогенных микроорганизмов - малоизученных возбудителей новых и вновь возникших заболеваний (Listeria monocytogenes, антибиотикорезистентных сальмонелл, энтерогемморагических эшерихий) связано с такими проблемами, как трудоемкость, длительность и недостаточная специфичность используемых методик.

Последнее обусловлено тем, что в качестве тестов идентификации, входящих в стандартизованные методы анализа, в настоящее время используют в основном характеристики метаболических свойств возбудителей, зачастую не позволяющие провести четкую дифференциацию патогенных представителей искомых родов и видов от непатогенных, имеющих одинаковое с патогенами фенотипическое выражение. Это снижает достоверность результатов анализа, осложняет оценку распространенности патогенов в пищевых продуктах и сырье и не гарантирует от необоснованных браковок продукции.

Наиболее достоверными в последние годы признаются методы генотипического анализа культур, выделенных на селективных питательных средах, основанные на выявлении кодируемых признаков патогенности или анализе последовательностей рибосомальной ДНК (16S, 26s pРНК). В связи с этим внедрение высокоспецифичных методов анализа и экспрессных диагностических тест-систем в официальные схемы санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов становится насущной необходимостью, которая позволит повысить эффективность работы и рационализировать ресурсы контрольных органов.

2. Общие положения и область применения

2.1. Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и в смывах с поверхностей оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов, а также методы ускоренной (за 24 ч) идентификации культур, выделенных из указанных объектов и подозрительных на принадлежность к Listeria monocytogenes и бактериям рода Salmonella, на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

2.2. Методы могут применяться в качестве альтернативных классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и/или подтверждения принадлежности выделенных микробиологическими методами культур к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов и состояния поверхностей предприятий по производству пищевых продуктов.

2.3. Предлагаемый метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и на поверхности оборудования и инвентаря предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе, или в определенном объеме смыва с поверхности.

2.4. При исследовании пищевых продуктов и состояния оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов на наличие патогенных микроорганизмов Listeria monocytogenes методами классического микробиологического анализа, метод гетерогенной твердофазной ДНК-РНК гибридизации может применяться для идентификации культур листерий после этапа их выделения на селективных дифференциально-диагностических средах.

2.5. Методические указания разработаны в соответствии с Федеральным законом от 02.01.00 N 29-ФЗ "О качестве и безопасности пищевых продуктов", Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, Положением о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации.

2.6. Методические указания рекомендованы для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за производством, хранением и оборотом пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, при проведении гигиенической оценки и выдаче санитарно-эпидемиологических заключений, а также при проведении санитарно-эпидемиологических расследований заболеваний, имеющих пищевой путь передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

2.7. Настоящие методические указания устанавливают также метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием. Метод может применяться в качестве дополнительного к классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей выявления бактерий Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

2.8. Метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-2001 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3. Сущность метода

3.1. Метод гетерогенного твердофазного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот основан на принципе гибридизации участка бактериального генома с закрепленным на твердофазном носителе (стенке пробирки) комплементарным к определяемой последовательности ДНК олигонуклеотидным зондом, меченым флюоресцентным красителем, и последующей детекции гибридов по степени их хемилюминесценции в приборе-люминометре.

3.2. Метод может выполняться в формате коммерчески доступных тест-систем (наборов), прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

3.3. Метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов (пищевых продуктов или смывной жидкости) в специальные неселективные и селективные питательные среды, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Salmonella", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий рода Salmonella должно подтверждаться в соответствии с ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella".

3.4. Метод ускоренной идентификации культур, выделенных из пищевых продуктов и с поверхности оборудования и инвентаря пищевых производств по ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella", ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или по МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах", и подозрительных на принадлежность к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes, предусматривает инкубирование культур для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в состав наборов "Люмипроб-24 Salmonella" или "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

3.5. Мишенями в реакции ДНК-РНК гибридизации являются:

- для бактерий рода Salmonella - последовательность нуклеотидов в области ДНК, кодирующая продукцию рибосомальной РНК, строго специфичной для всех представителей рода Salmonella;

- для Listeria monocytogenes - последовательность ДНК, кодирующая продукцию токсического белка листериолизина-O - основного фактора патогенности возбудителя листериоза.

3.6. Метод выявления бактерий Listeria monocytogenes предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов молока и молочных продуктов в специальную селективную питательную среду, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером, денатурацию бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3.7. При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий Listeria monocytogenes должно подтверждаться в соответствии с методами ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах".

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3.8. Мишенью в реакции ДНК-РНК гибридизации для Listeria monocytogenes является последовательность ДНК, кодирующая токсический белок листериолизин-О - основной фактор патогенности Listeria monocytogenes.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

4.1. Аппаратура и инструментарий

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН±0,01

ГОСТ 19881-74

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80 П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160±5)°С

ТУ 64-1-28-70-76*

________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, не приводятся. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (37±1)°С

ТУ 64-1-1382-83

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (41,5±1,0)°С

ТУ 64-1-1382-83

Баня водяная с подогревом (37±1)°С

ГОСТ 12026-76

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С

ТУ 42-22-608-75

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

ГОСТ 24104-88

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

ГОСТ 8284-78

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

ГОСТ 19569-89Е

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды

ГОСТ 6709-72

Гомогенизатор перистальтического типа "Микс-2", "Стомайкер" или других наименований, AES Lab., Cat. N AESAP 1066

Гомогенизатор типа "вортекс"

Штатив для 12-миллиметровых пробирок с держателем, "Europrobe", Cat. N Р08363086

Микропипетки на 200-1000 мкл, BIOHIT, Cat. N 720040 или "Ленпипет"

Мультистеппер, BIOHIT, Cat. N 730101

Диспенсер, BIOHIT, Cat. N 723046

Распределительная емкость - объем 1-2,5 л, BIOHIT

Люминометр для пробирок "Люмлайт" или "Люмлайт мини", "Europrobe", Cat. N EBLL01

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

ТУ-16-535-84

Холодильник бытовой электрический

ГОСТ 16317-87

Пинцет медицинский

ГОСТ 21241-89

Ножницы медицинские

ГОСТ 21239-89

Скальпель хирургический, 15 см

ГОСТ 21240-89

Часы механические сигнальные

ГОСТ 3145-84

Электроплитка

ГОСТ 14919-83

Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)


ТУ 64-1-2451-78

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная

ГОСТ 12026-76

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости

ГОСТ 1770-74

Воронки стеклянные

ГОСТ 25336-82

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 5556-81

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 смМУК 4.2.1955-05 Метод выявления и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-РНК анализа (с Дополнением N 1)

ГОСТ 29227-91

Пробирки типов П1, П2

ГОСТ 25336-82

Стекла предметные для микропрепаратов

ГОСТ 6672-75

Спиртовки лабораторные стеклянные

ГОСТ 23932-90

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100°С (цена деления шкалы 1°С)


ГОСТ 13646-68

Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов

ГОСТ 23932-90

Пакеты стерильные для гомогенизатора, AES Lab., Cat. N AES400/50G

Отраслевой стандарт для визуальной оценки мутности N 10, ГИСК им. Л.А.Тарасевича, МЗ РФ

Денситометр для бактериальных суспензий типа "Densi-La-Meter" или "Денсимат", ф. "Лахема", "BioMerieux"

Стандарт Макфарланда N 1, 2, 3, ф. "BioMerieux"

Петля бактериологическая калиброванная на 1 мкл, AES Lab., Cat. N AESDI100

4.3. Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический

ГОСТ 17206-84

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709-72

D-глюкоза, ч

ГОСТ 6038-79

D-лактоза, 1-водная

ТУ 6-09-22-98-79

Маннит

Ксилоза

Рамноза

Калия гидроокись

ГОСТ 24363-80

Калий фосфорно-кислый однозамещенный, ч

ГОСТ 4198-75

Калий фосфорно-кислый двузамещенный 3-водный

ГОСТ 2493-75

Кислота соляная, хч

ГОСТ 3118-77

Литий хлористый, ч или хч, или чда

ГОСТ 4328-77

Масло иммерсионное для микроскопии

ГОСТ 31739-78*

______________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 13739-78. - Примечание изготовителя базы данных.

Набор реактивов для окраски по Граму

Натрий-аммоний фосфорно-кислый двузамещенный, 4-водный, ч или хч

ГОСТ 4170-78

Натрия гидроокись, чда

ГОСТ 4328-77

Натрий лимонно-кислый, 5,5-водный, чда

ГОСТ 22280-75

Натрий хлористый, ч или хч, или чда

ГОСТ 4233-77

Пара-диметиламидобензальдегид, ч

ТУ 6-09-3272-77

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей

ГОСТ 13805-76

Полимиксин "М" или "В" сульфат по 500000 ед. (медпрепарат)

Спирт этиловый ректификованный технический

ГОСТ 18300-87

Спирт этиловый ректификованный

ГОСТ 5962-67

Железа аммонийного цитрат

Феноловый красный

ГОСТ 5853-51

Фенолфталеин

ГОСТ 5850-72

Фуксин основной

ТУ 6-09-4119-75

Хлороформ технический

ГОСТ 2-15-76-72*

________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

Уксусная кислота

ГОСТ 61-75

Сульфаниловая кислота

А-нафтол

Цинк порошкообразный

ГОСТ 3640

Эскулин

Экстракт дрожжевой сухой

Лития хлорид

Налидиксовая кислота Lab М, HiMedia

Акрифлавина гидрохлорид (трипафлавин), Lab M, HiMedia

Цефтазидим

Циклогексимид

Тест-штаммы Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria innocua, Staphylococcus aureus, Rhodococcus equi, Salmonella typhimurium, типичные по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам, ГИСК им. Л.А.Тарасевича

Пептонная вода забуференная (сухая), "BioMerieux" 51094

Триптозный ГРМ-агар и ГРМ-бульон ФС42-3377-97 (ГНЦПМ)

Среда ГРМ N 1 ВФС 42-2988-97 (ГНЦПН)

Питательный бульон и питательный агар

ТУ 10-02-02-789-176-94

Триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA), HiMedia M1214

Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом (TSYEB), HiMedia M1263

Среда RM LP24 Europrobe (Ref. EB2307, EB23002, EB23004)

Бульон Фразера (Fraser Broth), "BioMerieux" 42046

Бульон Фразера половинной концентрации (Half Fraser Broth), "BioMerieux" 42048

Fraser Broth Base, Fraser Supplement, Fraser Selective Supplement, HiMedia M 1327, FD 141, FE1251

Бульон для обогащения Listeria Enrichment Broth Merck 1.10549, HiMedia M569

Бульон вторичного обогащения для листерий - Fraser Secondary Enrichment Broth Base, HiMedia M1 083

Селективный бульон для листерий - Listeria Selective Broth Base, HiMedia M889

Среда RV Europrobe (Ref. EB2055, EB22502, EB22504)

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

МУК 4.2.1955-05 Метод выявления и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-РНК анализа (с Дополнением N 1)

Название документа: МУК 4.2.1955-05 Метод выявления и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-РНК анализа (с Дополнением N 1)

Номер документа: 4.2.1955-05

Вид документа: МУК (Методические указания по методам контроля)

Принявший орган: Главный государственный санитарный врач РФ

Статус: Действующий

Опубликован: Официальное издание. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005 год
Дата принятия: 22 февраля 2005

Дата начала действия: 22 февраля 2005
Дата редакции: 06 декабря 2010
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах