ГОСТ ISO 18415-2020 Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Обнаружение специфических и неспецифических микроорганизмов

     11.3 Тест на пригодность обнаружения микроорганизмов с использованием обогащения

11.3.1 Принцип выполнения

Для каждого штамма смешивают нейтрализованную пробу (исходную суспензию) с разбавленной стандартной суспензией микроорганизмов, а затем инкубируют полученную смесь. После инкубации производят посев истощающим штрихом на неселективную агаризованную питательную среду с целью выделения микроорганизмов. Параллельно готовят, инкубируют и высевают на чашки неинокулированный контрольный образец.

По окончании инкубации проверяют чашки Петри для теста на пригодность и контрольные чашки Петри на наличие микроорганизмов. Проводят интерпретацию результатов.

11.3.2 Методика

В пробирках, содержащих по 9 см разбавителя, готовят разведение стандартной суспензии для получения конечной концентрации микроорганизмов в диапазоне от 100 до 500 КОЕ/см. Для подсчета количества жизнеспособных микроорганизмов в разведении стандартной суспензии вносят 1 см суспензии в чашку Петри и заливают от 15 до 20 см расплавленной агаризованной среды, выдержанной на водяной бане при температуре, не превышающей 48°С. Инкубируют при температуре (32,5±2,5)°С в течение 20-24 ч.

Готовят в двух повторностях исходную суспензию в пробирке или колбе, соблюдая условия, выбранные для теста (не менее 1 г или 1 см испытуемой продукции, определенный объем бульона для обогащения). Если используют метод мембранной фильтрации, фильтруют в двух повторностях в условиях, выбранных для проведения испытаний, не менее 1 см испытуемой продукции и помещают каждый мембранный фильтр в пробирку или колбу, содержащие бульон для обогащения.

В асептических условиях вносят 0,1 см конечного разведения стандартной суспензии микроорганизмов в одну пробирку или колбу (тест на пригодность). Перемешивают, затем инкубируют обе пробирки или колбы (предназначенные для теста на пригодность и контроля неконтаминированной пробы) при температуре (32,5±2,5)°С в течение 20-24 ч.

Проводят выделение для каждой пробирки или колбы (предназначенных для теста на пригодность и контроля неконтаминированной пробы). Стерильной петлей делают пересев аликвоты (в тех же условиях, что предусмотрены для теста) инкубированной смеси на поверхность неселективной агаризованной питательной среды, содержащейся в количестве от 15 до 20 см в чашках Петри (диаметром от 85 до 100 мм). Инкубируют чашки с посевами при температуре (32,5±2,5)°С в течение 24-48 ч.

11.3.3 Интерпретация результатов теста на пригодность

Удостоверяются, что конечное разведение стандартных суспензий бактерий или дрожжей содержит от 100 до 500 КОЕ/см.

При отсутствии роста микроорганизмов на контрольной чашке методы нейтрализации и обнаружения признаются удовлетворительными, если на предназначенных для теста на пригодность чашках наблюдается рост характерных колоний инокулированных организмов.

________________

Под характерными колониями понимаются:

- для Staphylococus aureus: гладкие колонии, окрашенные в желтый цвет;

- для Pseudomonas aeruginosa: гладкие колонии от зеленоватого до желтоватого цвета;

- для Candida albicans: выпуклые гладкие колонии белого или кремового цветов;

- для Escherichia coli: гладкие колонии.

В случае роста микроорганизмов на контрольных чашках методы нейтрализации и обнаружения признаются удовлетворительными, если на предназначенных для теста на пригодность чашках выделяются характерные колонии инокулированных микроорганизмов (может присутствовать смешанная культура с колониями, обнаруживаемыми на контрольной чашке).

При отсутствии роста характерных колоний на предназначенных для теста на пригодность чашках методы нейтрализации и обнаружения признаются неудовлетворительными независимо от наличия роста микроорганизмов на контрольных чашках.

Отсутствие роста на предназначенных для теста на пригодность чашках указывает на то, что продукция сохраняет антимикробные свойства и необходимо внести изменения в условия, предусмотренные методом. Эта цель может быть достигнута путем увеличения объема бульона для обогащения при том же количестве продукции, или путем введения достаточного количества инактивирующего вещества в состав бульона для обогащения, или путем соответствующей комбинации изменений, которые обеспечивали бы рост бактерий и дрожжей.

Если, несмотря на применение соответствующих инактивирующих веществ и значительное увеличение объема бульона для обогащения, выделить жизнеспособную культуру описанным выше способом не удается, то указывают, что контаминация продукции данными видами бактерий и дрожжей маловероятна.