МУК 4.1.3379-16
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств бацитрацина в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа
1. Разработаны ФГБНУ "НИИ питания" (С.А.Хотимченко (руководитель), С.А.Шевелева, Н.Р.Ефимочкина, Л.П.Минаева) при участии ООО "Системные решения Стай-лаб" (А.В.Галкин).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 20 мая 2016 г. N 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю.Поповой 8 июля 2016 г.
4. Введены впервые.
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А.Ю.Попова 8 июля 2016 г.
1. Назначение и область применения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода определения (путем конкурентного иммуноферментного анализа с фотометрической детекцией при 450 нм) остаточных количеств бацитрацина в пищевых продуктах животного происхождения (нижний предел определения: в мясе скота и птицы, в продуктах из мяса и птицы - 0,009 мг/кг, в яйцах и яйцепродуктах - 0,011 мг/кг, в молоке и молочных продуктах - 0,011 мг/кг). Методика также может быть использована для анализа бацитрацина в кормах для животных (нижний предел определения: 0,092 мг/кг).
1.2. Методические указания предназначены для специалистов лабораторий Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также иных организаций и учреждений, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности пищевых продуктов, аккредитованных на проведение соответствующих исследований в установленном порядке.
1.3. Методические указания могут быть использованы в организациях, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов животного происхождения.
1.4. Методические указания носят рекомендательный характер.
2. Метод измерений
Количественное определение бацитрацина в пищевых продуктах основано на технологии твердофазного конкурентного иммуноферментного анализа, в основе которого лежит взаимодействие "антиген-антитело": лунки микротитровального планшета покрыты антителами к бацитрацину, и после внесения в лунки смеси, содержащей антиген (стандартные растворы бацитрацина + конъюгат бацитрацина с ферментом или подготовленная проба продукта + конъюгат бацитрацина с ферментом), свободный бацитрацин и конъюгат бацитрацина конкурируют за центры связывания антител к бацитрацину. Несвязавшийся конъюгат удаляется в процессе промывки. После добавления в лунки раствора субстрата/хромогена фермент в составе связавшегося с антителами к бацитрацину конъюгата взаимодействует с субстратом, превращая хромоген в вещество голубого цвета. Добавление стоп-реагента приводит к изменению цвета с голубого на желтый. Оптическую плотность прореагировавшей смеси измеряют фотометрически при 450 нм, по результатам измерения судят о количестве бацитрацина в исследуемой пробе (величина оптической плотности раствора обратно пропорциональна концентрации бацитрацина в исследуемой пробе продукта). Расчет содержания бацитрацина проводят по стандартной кривой или с помощью специального программного обеспечения.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства
3.1. Средства измерений
Автоматические пипеточные дозаторы с одноразовыми наконечниками с диапазоном объема доз от 0,005 до 0,05 см Весы лабораторные аналитические 120 г/0,001 мг Весы лабораторные общего назначения 2-го и 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г Микропланшетный иммуноферментный анализатор (планшетный фотометр, ридер) с диапазоном линейности измерения оптической плотности 0-2,5 и светофильтром на 450 нм Анализатор потенциометрический или рН-метр, погрешность измерений рН ±0,01 Цилиндры мерные, стаканы химические и колбы мерные вместимостью 25, 50, 100, 200, 250, 500 см Градуированные пипетки 2-го класса точности вместимостью 1 и 10 см |
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Вспомогательные устройства
Центрифуга настольная (эффективность не менее 2000 Ротатор (встряхиватель осевой) Шейкер лабораторный для пробирок типа Вортекс Гомогенизатор перистальтического типа со стерильными пластиковыми пакетами (или других видов, или фарфоровые ступки с пестиками) Холодильник бытовой электрический | |
Конические колбы на 100 см Пластиковые центрифужные пробирки (виалы) с закручивающимися крышками объемом 15 см Шкаф (стол) лабораторный с вытяжным устройством Программное обеспечение для обработки результатов ИФА |
Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Реактивы
Вода дистиллированная деминерализованная | |
Метанол, х.ч. Раствор гидроокиси натрия 0,1 М (для нейтрализации образцов молока) ________________
1) микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов с 8 отделяемыми лунками каждый), покрытый антителами к бацитрацину, в упаковке из фольги в комплекте с влагопоглотителем; 2) комплект стандартных растворов бацитрацина в воде (по 1 см 3) конъюгат бацитрацина с пероксидазой, концентрат ( 4) готовая смесь субстрата с хромогеном; 5) стоп-реагент (1 н серная кислота); 6) буфер для разбавления проб, готовый к употреблению; 7) буфер для разбавления конъюгата, готовый к употреблению; 8) буфер для промывки, концентрат ( |
Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.
4. Требования к безопасности и квалификации операторов
4.1. Исследования пищевых продуктов с использованием методики ИФА бацитрацина проводят с соблюдением требований техники безопасности, установленных для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007), а также инструкции по использованию тест-наборов.
4.2. При выполнении измерений с использованием планшетного иммуноферментного анализатора и работе с электроустановками необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии ГОСТ Р 12.1.019-09 и инструкцию по эксплуатации прибора.
Попробуйте «Техэксперт: Базовые нормативные документы» бесплатно