Статус документа

ГОСТ 34137-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания цефалоспоринов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (с Поправкой, с Изменением № 1)

8 Порядок выполнения анализа

8.1 Условия хроматографического разделения

8.1.1 Масс-спектрометр и хроматограф включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2 Например, для колонки диаметром 2,1 мм, длиной 150 мм, с обращенно-фазным сорбентом С18 с размером частиц не более 5,0 мкм, соблюдают следующие условия хроматографирования:

- температура колонки - 40°С;

- скорость потока подвижной фазы - 0,2 см/мин;

- объем вводимой пробы - 20 мм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б по 6.2.1) в соответствии с таблицами 3 и 4.

Таблица 3 - Условия градиентного элюирования при регистрации положительных ионов для цефалоспоринов, исключая цефтиофур и его метаболиты


Время, мин	Подвижная фаза А, %	Подвижная фаза Б,%
0,0	85	15
1,0	85	15
17,0	15	85
17,1	85	15
25,0	85	15

Таблица 4 - Условия градиентного элюирования при регистрации положительных ионов для цефтиофура и его метаболитов


Время, мин	Подвижная фаза А, %	Подвижная фаза Б,%
0,0	85	15
2,0	85	15
12,0	35	65
12,1	85	15
14,0	85	15

8.1.3 Параметры режима ММР при измерении цефалоспоринов приведены в таблице 5.

Параметры настройки масс-спектрометрического детектора:

- напряжение на распыляющем капилляре () 5500 В при регистрации положительных ионов;

- температура источника 450°С;

- разрешение квадруполей Q1/Q3 - единичное;

- давление газа для фрагментации (CAD) - 6 кПа.

Таблица 5 - Параметры воздействия на ионы в режиме ММР с регистрацией положительных ионов


Аналит	Ион- предшественник,	Ион-продукт,		Время удержи- вания, мин	Энергия соуда- рений, эВ		Ускоряющее напряжение на выходе из ячейки столкновений, В
Цефацетрил	363,8	114,1	208,1	4,37	27	15	13	20
Цефалексин	347,8	158,4	106,3	7,26	16	10	35	14
Цефалоним	458,8	152,2	337,1	5,77	26	16	13	15
Цефоперазон	646,2	143,7	290,4	8,6	41	12	31	12
Цефкином	529,3	134,1	396,3	5,21	20	13	18	15
Цефапирин	424	364,1	152,2	4,82	15	15	32	12
Дезацетил цефапирин	381,8	112	292,1	2,21	30	14	20	15
Цефадроксил	363,8	226,1	347,1	2,2	23	16	8	15
Цефсулодин	533,2	123,3	321,2	3,5	18	20	20	14
Цефотаксим	456	125,2	277,1	7,21	70	7	20	14
Цефтибутен	410,8	268	139,3	4,65	20	20	40	11
Цефподоксим	558,3	410,2	156,2	13,38	20	30	40	13
Цефпиром	514,9	120,2	401,3	4,22	21	15	27	20
Цефотиам	526,2	168,2	353,2	2,12	39	19	16	16
Цефаклор	367,8	118	106,1	6,81	46	6	37	20
Цефетамет	511,9	241,2	298,3	13,53	23	20	26	18
Цефепим	482,2	241	126,2	13,51	23	23	43	20
Десфуроил цефтиофур ацетамид	487	241	126	6,82	26	12	40	14
Цефетамет-ДЗ*	514,9	244	-	13,44	24	-	25	-
Десфуроил цефтиофур ацетамид-ДЗ*	490	244	-	6,78	28	-	15	-
* Внутренний стандарт.

Примечание - Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.1.4 Контроль чувствительности хромато-масс-спектрометрической системы осуществляют введением в инжектор хроматографа 20 мм матричного градуировочного раствора или (см. 6.3.1.3, 6.3.2.3) в зависимости от типа анализируемой матрицы. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.

8.2 Построение градуировочной характеристики