ГОСТ ISO 16649-2-2015
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И КОРМОВ
Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка)
Часть 2
Методика подсчета колоний при температуре 44°С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронида
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of -glucuronidase-positive Escherichia coli. Part 2. Colony-count technique at 44°C using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl--D-glucuronide
МКС 67.100.30
Дата введения 2017-07-01
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 января 2015 г. N 74-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
(Поправка. ИУС N 4-2020).
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 августа 2016 г. N 955-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16649-2-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 16649-2:2001* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка). Часть 2. Методика подсчета колоний при температуре 44°С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронида" ("Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of -glucuronidase-positive Escherichia coli. Part 2. Colony-count technique at 44°C using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl--D-glucuronide", IDT).
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 "Микробиология" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).
В стандарт внесены следующие редакционные изменения: единица измерения миллилитр (мл) заменена на кубический сантиметр (см); 5.2.1 и 5.2.2 дополнены примечаниями.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2020 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
Международный стандарт ISO 16649 состоит из следующих частей под общим наименованием "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка)":
- часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44°С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронида;
- часть 2. Методика подсчета колоний при температуре 44°С с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронида;
- часть 3. Метод наиболее вероятного числа с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронида.
В данном стандарте описаны два горизонтальных метода (ISO 16649-1 и ISO 16649-2) для подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка).
Пользователь может выбрать либо ISO 16649-1, либо ISO 16649-2. Каждая часть предназначена для общего применения. Однако необходимо использовать ISO 16649-1 для пищевой продукции, которая может содержать микроорганизмы, подвергшиеся шоковому воздействию.
В настоящем стандарте приводится горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli в продуктах, предназначенных для потребления человеком в пищу, или в продуктах, предназначенных для корма животных. В нем используется методика подсчета колоний при температуре 44°С на плотной питательной среде, содержащей хромогенный компонент для обнаружения фермента бета-глюкуронидазы.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Штаммы Escherichia coli, которые не растут при 44°С, в частности бета-глюкуронидаза-отрицательные, такие как Escherichia coli О 157, не будут обнаружены.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения):
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs. Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination. Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятичных разведений)
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs. General rules for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 бета-глюкуронидаза-положительные Escherichia coli (-glucuronidase-positive Escherichia coli): Бактерии, которые при температуре 44°С образуют типичные колонии синего цвета в среде с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ) в условиях, описанных в настоящем стандарте.
3.2 подсчет бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (enumeration of -glucuronidase-positive Escherichia coli): Определение количества колониеобразующих единиц (КОЕ) бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр или грамм образца, когда испытание и вычисления проводятся в соответствии с настоящим стандартом.
4.1 Заданное количество исследуемого образца или исходной суспензии засевают в две параллельные чашки Петри со средой с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ).
При таких же условиях каждое последующее десятичное разведение образца или исходной суспензии засевают в две чашки Петри со средой ТВХ.
Чашки инкубируют в течение 18-24 ч при температуре (44±1)°С, затем исследуют на наличие колоний, типичных для бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli.
4.2 Рассчитывают количество КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на грамм или кубический сантиметр образца (см. пункт 10).
См. действующую лабораторную практику в ISO 7218.
5.1 Разбавитель
См. ISO 6887-1 или соответствующий стандарт, касающийся подлежащего исследованию продукта.
5.2 Питательная среда: среда с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ)
5.2.1 Состав
Ферментативный гидролизат казеина | 20,0 г |
Соли желчных кислот N 3 | 1,5 г |
5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуроновая кислота (ВСIG) | 144 мкмоль |
Диметилсульфоксид (DMSO) | 3 см |
Агар | от 9 до 18 г |
Вода | 1000 см |
Например, 0,075 г соли циклогексиламмония. |
5.2.2 Подготовка
Растворяют ВСIG в диметилсульфоксиде или в рекомендованном изготовителем разбавителе.
Растворяют все компоненты в воде и нагревают до кипения.
При необходимости отрегулировать pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,2±0,2) при температуре 25°С.
Производят стерилизацию в автоклаве при температуре 121°С в течение 15 мин. Сразу же охлаждают среду в водяной бане (6.3) при температуре от 44°С до 47°С.
Обычное микробиологическое лабораторное оборудование (см. ISO 7218):
6.1 Устройство для суховоздушной стерилизации (печь) или паровой стерилизации (автоклав).
6.2 Инкубаторы, способные поддерживать температуру (44±1)°С.
6.3 Водяная баня, способная поддерживать температуру от 44°С до 47°С.
6.4 Пробирки, бутылки или колбы необходимой вместимости.