Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности

3. Методы анализа

Контроль сырья и готовой продукции (определение общего количества бактерий, определение бактерий группы кишечных палочек, просмотр микроскопических препаратов) проводится по ГОСТ 9225-84. Содержание спор мезофильных анаэробных бактерий определяется по ГОСТ 25102-82, количество дрожжей и плесневых грибов - по ГОСТ 26888-86, наличие ингибирующих веществ - по ГОСТ 23454-79. Не гостированные методы используются для внутризаводского контроля.

3.1. Метод определения редуктазы с метиленовым голубым

В процессе жизнедеятельности бактерии выделяют в окружающую среду, наряду с другими окислительно-восстановительными ферментами, анаэробные дегидразы, по старой классификации называемые редуктазами. Существует некоторый параллелизм между общим количеством бактерий в молоке и содержанием в нем редуктаз, что дает возможность использовать редуктазную пробу как косвенный показатель бактериальной обсеменности сырого молока.

3.1.1. Сущность метода.

Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсеменность сырого молока.

3.1.2. Проведение анализа.

В пробирки наливают по 1 см рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирок.

Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37+/-1)°С.

При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещенной в термостат с температурой (37+/-1)°С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37+/-1)°С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 20 мин, 2 ч, через 5 ч 30 мин с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока, при этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

3.1.3. Обработка результатов.

В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл.2.

Таблица 2

3.2. Метод определения редуктазы с резазурином

3.2.1. Сущность метода.

Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсеменность сырого молока.

3.2.2. Проведение анализа.

Пробу с резазурином следует проводить не ранее чем через 2 ч после доения.

В пробирки наливают по 1 см рабочего раствора резазурина и по 10 см исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного перевертывания пробирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37+/-1)°С.

При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37+/-1)°С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, температуру ее поддерживают в течение всего времени определения (37+/-1)°С.

Пробирки с молоком и резазурином на протяжении анализа должны быть защищены от света прямых солнечных лучей (редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой).

Время погружения пробирок в редуктазник считается началом анализа.