ГОСТ 23454-79

Группа Н19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО

Методы определения ингибирующих веществ

Milk. Methods for determination of the inhibitors

МКС 67.100.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 1980-01-01

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 30 января 1979 г. N 334 дата введения установлена с 01.01.80

Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)

Изменение N 4 принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 11 от 25.04.97)

Зарегистрировано Техническим секретариатом МГС N 2499

За принятие изменения проголосовали:

ИЗДАНИЕ (август 2009 г.) с Изменениями N 1, 2, 3, 4, утвержденными в январе 1985 г., сентябре 1987 г., декабре 1991 г., августе 1997 г. (ИУС 4-85, 1-88, 4-92, 11-97).

Настоящий стандарт распространяется на молоко и устанавливает методы определения ингибирующих веществ, к которым относятся: антибиотики, формалин, перекись водорода и другие моющие, дезинфицирующие и консервирующие вещества.

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

1.1. Методы отбора проб молока и подготовки их к анализу - по ГОСТ 9225-84.

До проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре (6±2) °С не более суток.

(Измененная редакция, Изм. N 2).

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ С ИНДИКАТОРОМ РЕЗАЗУРИНОМ

2.1. Сущность метода

Метод основан на восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизма вида Streptococcus thermophilus.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке содержание пенициллина 0,01 МЕ/см; массовую долю формалина 0,005%; массовую долю перекиси водорода 0,01%; стрептомицина 10 мкг/см; тетрациклина 1 мкг/см.

(Измененная редакция, Изм. N 2, 3).

2.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89* или стерилизаторы аналогичного типа.

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285-96).

Редуктазник по нормативному документу или баня водяная, обеспечивающая регулирование температуры от 30 до 50 °С, или баня водяная без терморегуляции, помещаемая в термостат.

Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 50 °С с отклонением от заданной ±1 °С.

Холодильник бытовой по ГОСТ 16217-83.

Термометры стеклянные жидкостные (нертутные) типа Б, диапазон измерения температуры от 0 до 100 °С по ГОСТ 28498-90.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88*.

________________

* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001.

Пробирки стеклянные типов П1 и П2, высотой (150±5) мм и диаметром (16±1) мм по ГОСТ 25336-82.

Пипетки 1-1-1; 4-1-1; 2-1-10 по ГОСТ 29169-91.

Колбы мерные вместимостью 200 см по ГОСТ 25336-82.

Штатив для пробирок.

Петля бактериологическая.

Тара стеклянная типа IV, вместимостью 200 см по ГОСТ 15844-92.

Пробки резиновые конусные по нормативному документу.

Резазурино-натриевая соль по нормативному документу, основной раствор.

Препарат сухой для контроля определения ингибирующих веществ в молоке (СКИВ) по нормативному документу.

Тест-культура для определения ингибирующих веществ (Streptococcus thermophilus штамм 2 КС) по нормативному документу.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Молоко обезжиренное кислотностью не более 19 °Т, получаемое из коровьего молока не ниже 2-го сорта по ГОСТ 13264-88* или молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970-87**, предварительно восстановленное и проверенное на отсутствие ингибирующих веществ.

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52054-2003.

** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52791-2007.

Препарат бактериальный термофильного молочнокислого стрептококка (S. thermophilus штамм ) для определения ингибирующих веществ по нормативному документу.

Препарат бактериальный молочнокислого термофильного стрептококка для определения ингибирующих веществ в молоке "Интест" - по нормативному документу.

(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3, 4).

2.3. Подготовка к анализу

2.3.1а. Приготовление стерильного обезжиренного молока

Обезжиренное молоко разливают по 100 см в бутылочки или по 10 см в пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (10±1) мин.

(Введен дополнительно, Изм. N 3).

2.3.1. Основной раствор резазурина массовой концентрации 0,0005 г/см готовят по ГОСТ 9225-84.

(Измененная редакция, Изм. N 2).

2.3.2. Приготовление коллекционной тест-культуры

2.3.2.1. Для восстановления активности культуры бутылочку со 100 см обезжиренного стерилизованного молока подогревают до температуры (43±1) °С. Во флакон с сухой тест-культурой добавляют от 5 до 7 см стерилизованного молока и тщательно перемешивают. Содержимое флакона вносят в бутылочку с молоком, подготовленным как указано выше, и перемешивают.

Термостатируют при температуре (41±1) °С в течение 12-18 ч до образования плотного сгустка, затем охлаждают до температуры (6±2) °С и используют для приготовления коллекционной тест-культуры.

2.3.2.2. Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см стерильного обезжиренного молока вносят 1 петлю культуры, приготовленной по п.2.3.2.1, и выдерживают в термостате при температуре (41±1) °С в течение 16-18 ч.

Коллекционную культуру хранят при температуре (6±2) °С и перевивают через 10-14 сут.

Через 3-4 пересадки ее снова готовят из сухой.

Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микроскопическому препарату соответствует предъявленным требованиям (продолжительность сквашивания при перевивке 16-18 ч, сгусток плотный; консистенция однородная, допускается мягкая крупитчатость или вязкая; в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры - диплококки одиночные или собранные в цепочки).

2.3.3. Приготовление рабочей тест-культуры

2.3.3.1. Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной в пробирках или бутылочках в зависимости от необходимого количества или из сухого бактериального препарата термофильного молочнокислого стрептококка для определения ингибирующих веществ.

2.3.3.2. При приготовлении рабочей тест-культуры из коллекционной в пробирку с 10 см стерильного обезжиренного молока вносят 1 петлю коллекционной тест-культуры, а в бутылочку со 100 см стерильного обезжиренного молока вносят 1 каплю коллекционной тест-культуры и выдерживают в термостате при температуре (41±1) °С 16-18 ч до образования плотного сгустка.

Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.

В случае необходимости культуру помещают в холодильник при температуре (6±2) °С и используют в течение суток.

Непосредственно перед применением рабочую культуру перемешивают путем интенсивного встряхивания.

(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3).

2.3.3.3. При приготовлении рабочей культуры из сухого бактериального препарата во флакон с препаратом добавляют стерильной пипеткой 10 см стерильной или кипяченой дистиллированной воды. Флакон закрывают пробкой и его содержимое тщательно перемешивают до получения однородной взвеси.

Культуру используют для проведения анализа.

Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата, предназначена для анализа 30 проб исследуемого молока. При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) °С и используют в течение не более 8 ч.

При приготовлении рабочей культуры из сухого бактериального препарата "Интест" во флакон с препаратом добавляют стерильной пипеткой 10 см стерильной или кипяченой дистиллированной воды, подогретой до температуры (45±1) °С. Флакон закрывают пробкой и его содержимое тщательно перемешивают до получения однородной взвеси.