Статус документа

ГОСТ 32903-2014 Продукция соковая. Определение водорастворимых витаминов: тиамина (B(1)), рибофлавина (В(2)), пиридоксина (B(6)) и никотинамида (PP) методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии

6 Метод определения содержания витаминов В, В и РР с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектором (метод А)

6.1 Сущность метода

Метод основан на разделении группы водорастворимых витаминов на твердом носителе С, привитом на высокочистую силикагелевую основу и дополнительными полярными группами с короткой цепочкой (изопропил) по обращенно-фазовому механизму.

Идентификацию и количественный расчет пиков разделенных витаминов проводят при индивидуальных максимумах светопоглощения в ультрафиолетовой области спектра сопоставлением со временем удерживания пиков в градуировочных растворах.

Таблица 1 - Параметры идентификации витаминов В, В и РР


Витамин	Время удерживания, мин	Длина волны , нм, при максимуме светопоглощения
Тиамин (В)	3,7±0,2	245±2
Пиридоксин(В)	5,7±0,3	290±2
Никотинамид (РР)	7,0±0,4	261±2
Примечание - При определении витамина B необходимо принимать во внимание матричное влияние сахаров и кислот. Для учета матричного влияния кислот и сахаров приготовление градуировочных растворов проводят с использованием матричного раствора (см. приложение Б). Содержание данных компонентов, на порядки превышающее содержание витамина В, приводит к смещению максимума поглощения последнего в область 254-264 нм. В большинстве случаев максимум поглощения витамина B под влиянием кислот и сахаров обнаруживается при 256,2 нм (см. приложение В).

6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Хроматограф жидкостной с насосом высокого давления, спектрофотометрическим детектором, позволяющим проводить измерения оптической плотности с программируемой длиной волны в диапазоне 190-600 нм и характеристиками, указанными в таблице 2, или диодноматричным детектором, позволяющим проводить измерения оптической плотности на нескольких длинах волн в диапазоне от 190 до 800 нм, и характеристиками, указанными в таблице 3.

Таблица 2 - Рекомендуемые технические и метрологические характеристики для спектрофотометрического детектора


Технические характеристики при 254 нм			Метрологические характеристики
			Относительное среднеквадратическое отклонение, %
уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, не более	дрейф нулевого сигнала, не более	предел детектирования по фенолу, не более	по площади пика, не более	по высоте пика, не более	по времени удерживания, не более	по площади пика за 8 ч непрерывной работы, не более
1,5·10 е.о.п.	5·10 е. о. п./ч	7·10 г/см	5	5	1	4

Таблица 3 - Рекомендуемые технические и метрологические характеристики для диодноматричного детектора


Технические характеристики при 254 нм			Метрологические характеристики
			Относительное среднеквадратическое отклонение выходного сигнала, %		Относительное изменение выходного сигнала за 8 ч непрерывной работы, %
уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, не более	дрейф нулевого сигнала, не более	предел детектирования по антрацену, не более	по времени удерживания, не более	по площади пика, не более	по времени удерживания, не более	по площади пика, не более
3·10 е. о. п.	1,5·10 е. о. п./ч	2·10 г/см	2	2	4	4

Колонка хроматографическая для ВЭЖХ длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенной фазой - октадецилсиликагелем С с размером частиц 1,8-5,0 мкм, содержащим на концах привитые гидрофильные группы, обеспечивающая эффективность разделения в отношении витаминов (см. приложение Г).*

_______________

* Колонки Thermo Scientific AQUASIL С18 HPLC, RESTEK Pinnacle DB Aqueous C18 и Agilent Zorbax AAA опробованы и обеспечивают необходимое разделение. Данная информация не является рекламой указанных колонок и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Компьютер с установленным программным обеспечением для управления хроматографом и обработки результатов измерений.

рН-метр с погрешностью измерений не более 0,05 ед. рН, комбинированным стеклянным электродом по ГОСТ 9245.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального (I) класса точности с наибольшим пределом взвешивания 150 г, пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,0005 г.

Дозаторы пипеточные одноканальные переменной вместимости от 100 до 1000 мм с допустимой относительной погрешностью дозирования ±2% по воде с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.

Пипетки градуированные 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 и 1-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2а-50-2, 2а-100-2, 2а-200-2, 2а-250-2 и 2а-1000-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры мерные 1-100-2 и 1-500-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы В-1-100, В-1-200 и Н-1-2000 по ГОСТ 25336.