ГОСТ 32373-2013 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Основные требования к проведению испытаний по оценке острой токсичности при накожном поступлении

     4 Описание тестового метода

4.1 Подготовка

Животные проходят подготовку к исследованию (содержание в лабораторных клетках в соответствующих условиях и специальное кормление) в течение не менее пяти дней до начала исследования. Перед тем как приступить к проведению исследования, здоровые молодые особи произвольно распределяются по группам. Приблизительно за 24 ч до начала исследования шерстка должна быть удалена - выстрижена или выбрита - со спинной части тела животного. При стрижке или бритье необходимо быть осторожным, чтобы не повредить кожу животного, так как это может повлиять на процесс всасываемости. Не менее 10% поверхности тела должно быть очищено для нанесения испытуемого вещества. Если испытывается твердое вещество, которое можно измельчить, его надо измельчить и затем развести в воде или, при необходимости, в подходящем растворителе, чтобы обеспечить лучшее проникновение через кожу животного. При использовании растворителя необходимо учесть его влияние при воздействии испытуемого вещества на кожу. Жидкие тестируемые вещества как правило не разбавляют.

4.2 Условия проведения эксперимента
     

    4.2.1 Подопытные животные

Выбор животного

Испытание проводится на взрослых особях крыс, кроликов или морских свинок. Могут быть привлечены и другие виды животных, но их использование требует обоснования.

Для эксперимента необходимы животные массой:

крысы - 200-300 г;

кролики - 2-3 кг;

морские свинки - 350-450 г.

В исследованиях на острую токсичность с животными более высшего порядка, чем грызуны, целесообразно использование меньшего количества животных. Доза вводимого вещества должна быть тщательно продумана, и не превышать умеренно токсичную. В подобных экспериментах следует избегать введения испытуемого вещества в смертельных дозах.

Число животных и пол

Для каждого уровня дозировки должны быть использованы не менее пяти животных одного пола. Испытания не проводятся на рожавших и беременных самках. Испытанию должны подвергнуться животные того пола, который, по имеющейся информации, более чувствителен.

Условия содержания

Животные должны содержаться отдельно. В лабораторной комнате температура должна быть (22±3)°С для грызунов, (20±3)°С для кроликов, относительная влажность от 30% до 70%, искусственное освещение с последовательностью 12 часов - свет, 12 часов - темнота.

При кормлении может быть использована обычная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды.

4.2.2 Уровень вводимых доз

Доз должно быть не менее трех соответственно распределенных, чтобы продуцировать подопытную группу с диапазоном токсических воздействий и летального исхода. Данных должно быть достаточно для построения кривой зависимости смертности животных от дозы вещества и, где возможно, для определения величины .

4.2.3 Испытание предельной (наивысшей) дозы

Испытание предельной (наивысшей) дозы с уровнем не ниже 2000 мг/кг массы тела может быть проведено в подопытной группе из пяти самцов и пяти самок. Процедуры испытания описаны ниже. В случае гибели животных вследствие воздействия вещества может понадобиться всестороннее изучение причин.

4.2.4 Период наблюдения

Период наблюдения должен составлять не менее 14 дней. Между тем, продолжительность периода наблюдения не должна быть жестко фиксированной и зависеть от токсических реакций, их интенсивности и длительности периода восстановления; при необходимости период наблюдения может быть увеличен. Очень важно время появления и исчезновения признаков токсичности, время смерти, особенно если наблюдается тенденция к замедленной смерти.

4.3 Процедура

Животные должны содержаться в одиночных клетках. Вещество равномерно наносится на поверхность тела животных, составляющую приблизительно 10% от общей поверхности тела. При работе с высокотоксичными веществами поверхность покрытия может быть меньше, но вещество должно быть, насколько возможно, равномерно распределено тонким слоем.

Испытуемое вещество, нанесенное на марлевую повязку, зафиксированную не вызывающей раздражения лентой, должно контактировать с кожей на протяжении 24 ч. Участок тела, через который воздействует испытуемое вещество, должен быть покрыт способом, позволяющим удерживать это вещество, и не дающим возможности животному проглотить испытуемое вещество. Можно использовать ограничители движения, чтобы животное не смогло слизнуть вещество, но полная иммобилизация не рекомендуется.

Остаток испытуемого вещества по окончании периода экспозиции должен быть удален при помощи воды или другими методами очищения кожи животного.

Наблюдения должны регистрироваться систематически, особенно в первый день, а записи вестись по каждому животному в отдельности. Тщательный клинический осмотр должен проводиться ежедневно, другие наблюдения - ежедневно с выполнением соответствующих действий, направленных на минимизацию потерь животных для исследования. Среди них - вскрытие или замораживание животных, найденных мертвыми или изолированными, умерщвленными по медицинским показателям или вследствие агонии.

Необходимо наблюдать за изменениями состояния кожи и шерсти, глаз, слизистых оболочек, дыхательной, кровеносной, вегетативной и центральной нервной систем, соматомоторной деятельности и за поведением. Внимание должно фокусироваться на явлениях тремора, конвульсий, слюноотделения, диареи, летаргии, сна и комы. Время смерти должно быть зафиксировано максимально точно. Масса тела каждой особи должна измеряться до начала эксперимента, еженедельно, после периода воздействия и на момент гибели. Изменения массы должны калькулироваться и записываться.