ГОСТ ISO 20481-2013 Кофе и кофейные продукты. Определение содержания кофеина с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Стандартный метод (с Поправками)

     8 Процедура проведения анализа

8.1 Определение сухого вещества в кофе (необязательное, см. 9.2)

Рассчитывают содержание сухого вещества в кофе, значение которого будет использовано в 9.2, на основе содержания влаги, определенного на анализируемой пробе (см. раздел 7) в соответствии:

- с ISO 6673 для зеленого кофе;

- ISO 11817 для жареного кофе;

- ISO 3726 или [8] для растворимого кофе.

Для других типов кофе и кофейных продуктов процедура определения содержания сухого вещества должна согласовываться между заинтересованными сторонами.

8.2 Проба для анализа

8.2.1 Жареный и зеленый кофе

На аналитических весах (см. 5.1) взвешивают с точностью до 1 мг приблизительно 1 г пробы для анализа (см. 7.1, 7.2) и помещают в мерную колбу вместимостью 250 см (см. 5.11).

8.2.2 Растворимый кофе

На аналитических весах (см. 5.1) взвешивают с точностью до 1 мг приблизительно 0,5 г пробы для анализа (см. 7.3) и помещают в мерную колбу вместимостью 250 см (см. 5.11).

8.2.3 Смешанные напитки

На аналитических весах (см. 5.1) взвешивают с точностью до 1 мг приблизительно 1 г пробы для анализа (см. 7.4) и помещают в мерную колбу вместимостью 250 см (см. 5.11).

8.3 Экстрагирование кофеина

В колбу, содержащую пробу для анализа (см. 8.2.1, 8.2.2 или 8.2.3), добавляют 5 г оксида магния (см. 4.2) и приблизительно 200 см воды. Помещают колбу на водяную баню, функционирующую при температуре кипения, и ждут, пока раствор не достигнет температуры как минимум 90 °С. Продолжают нагревание колбы в водяной бане 20 мин, перемешивают время от времени, покачивая или встряхивая. Снимают мерную колбу с водяной бани, охлаждают до комнатной температуры водопроводной водой и восполняют объем водой. Ждут, пока не произойдет осаждение твердого вещества.

Берут аликвоту раствора и фильтруют через фильтр с порами 0,45 мкм (5.2), отбрасывая первые несколько кубических сантиметров. Полученный фильтрат готов для разделения методом ВЭЖХ.

8.4 Проведение анализа

8.4.1 Настройка оборудования

Примечание - Подвижную фазу перед использованием следует дегазировать в течение 20 мин в ультразвуковой ванне (см. 5.6) или продуть гелием. Если хроматограф оборудован дегазатором, достаточно 10 мин.

Готовят хроматограф (см. 5.3) в соответствии с инструкциями изготовителя и устанавливают следующие параметры хроматографического разделения:

- скорость потока подвижной фазы (см. 4.4): 1,0 см/мин;

- УФ детектор устанавливается на длину волны 272 нм (254 нм при использовании фильтрового детектора). Необходимо обеспечить, чтобы диапазон чувствительности детектора соответствовал пику стандартного раствора (при использовании нескольких стандартных растворов - максимальному пику).

8.4.2 Хроматографический анализ

Как только скорость потока подвижной фазы и соответствующее давление становятся стабильными, оставляют систему как минимум на 10 мин для достижения равновесия. Затем вводят 0,01 см стандартного раствора в колонку, используя микролитровый шприц (5.7), с последующим введением равного объема экстракта пробы для анализа (8.3). При использовании одного стандартного раствора, его вводят с регулярными интервалами (обычно после шести экстрактов пробы). После каждой серии тщательно промывают хроматографическую систему и колонку метанолом 50% (об.) (см. 4.1) и водой и устанавливают на колонку заглушки, если они удалялись.