ГОСТ ISO 20481-2013 Кофе и кофейные продукты. Определение содержания кофеина с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Стандартный метод (с Поправками)

     4 Реактивы

Если не установлено иное, то следует использовать только реактивы признанной аналитической чистоты и только воду, соответствующую требованиям ISO 3696, класс 1.

4.1 Метанол, класса для ВЭЖХ.

4.2 Магния оксид , тяжелый, высокой чистоты.

________________

Примером продукции, имеющейся в продаже, является Merck 105867. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой данной продукции со стороны ISO.

Примечание - Использование существенно для срока службы аналитической колонки, особенно для зеленого кофе. Количество используемого зависит от оборудования и от типа кофейного продукта.

Данные о прецизионности в приложении A были получены с использованием процедуры, описанной в настоящем стандарте.

Появление интерферирующих пиков на хроматограмме может быть обусловлено неправильной адсорбцией. В этих случаях используемый подлежит проверке.

4.3 Кофеин (1,3,7-триметилксантин; 1,3,7-триметил-1H-пурин-2,6(3H,7H)-дион; метилтеобромин; ), чистый безводный.

4.4 Подвижная фаза, 24% (об.) водный раствор метанола.

Меры предосторожности - Следует использовать перчатки, средства защиты глаз и готовить реактивы в вытяжном шкафу.

Переносят 240 см метанола (см. 4.1) в мерную колбу вместимостью 1 дм с одной меткой (см. 5.11). Доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.2).

Примечание - Изменяя отношение метанола и воды, можно регулировать время удерживания кофеина с целью оптимизации хроматографического разделения на используемой колонке.

4.5 Стандартные растворы кофеина [1]

4.5.1 Исходный раствор, соответствующий концентрации 200 мг/дм

Взвешивают (0,200±0,001) г безводного кофеина (см. 4.3) в мерную колбу вместимостью 1 дм (см. 5.11). Добавляют достаточное количество теплой воды до половины объема колбы. Перемешивают до полного растворения кофеина, охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки водой и перемешивают.

Раствор устойчив при температуре +4 °С в течение месяца. Хранить в холодильнике.

4.5.2 Разбавленный стандартный раствор для обычного кофе, соответствующий концентрации приблизительно 40 мг/дм

С помощью пипетки (см. 5.12) вносят 50 см стандартного исходного раствора кофеина (см. 4.5.1) в мерную колбу вместимостью 250 см (см. 5.11). Доводят водой до метки и перемешивают.

Готовят свежий стандартный раствор ежедневно.

4.5.3 Разбавленный стандартный раствор для декофеинизированного кофе, соответствующий концентрации приблизительно 4 мг/дм

С помощью пипетки (см. 5.12) вносят 5 см стандартного исходного раствора кофеина (см. 4.5.1) в мерную колбу вместимостью 250 см (см. 5.11). Доводят водой до метки и перемешивают.

Готовят свежий стандартный раствор ежедневно.

4.5.4 Градуировочный график

Для построения градуировочной зависимости используют от трех до пяти точек. Рекомендуется интервал концентраций от 5 до 25 мг/дм для обычного кофе и от 0,5 до 2,5 мг/дм для декофеинизированных проб.