ГОСТ EN 14122-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение витамина B с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of vitamin B by HPLC

МКС 67.050

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 093)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 04 марта 2014 г. N 77-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14122-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14122:2003* Foodstuffs. Determination of vitamin B by HPLC (Продукты пищевые. Определение витамина В с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Европейский региональный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN.

Перевод с немецкого языка (ge).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 ВЗАМЕН ГОСТ 25999-83 в части разделов 3 и 4

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта предусматривает использование опасных веществ, процедур и оборудования. В задачи настоящего стандарта не входит решение всех проблем, связанных с безопасностью его применения. Ответственность за принятие мер предосторожности и соблюдение правил техники безопасности лежит на пользователе стандарта.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина B в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание витамина B определяется как общее содержание тиамина, включая его фосфорилированные производные.

     2 Нормативные ссылки

Настоящий стандарт содержит отдельные положения из другого нормативного документа*, обозначенного приведенной в данном разделе датированной нормативной ссылкой. Все последующие изменения ссылочного нормативного документа допустимо использовать только после внесения соответствующих изменений в настоящий стандарт.

_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.     

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстракции тиамина из пробы путем кислотного гидролиза, последующем ферментативном дефосфорилировании тиамина и его количественном определении с помощью ВЭЖХ с применением предварительной, либо послеколоночной конверсии в тиохром [1]-[6].

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.

4.2 Реактивы и растворы

4.2.1 Метанол для ВЭЖХ чистотой не менее 99,8%.

4.2.2 Кислота уксусная, раствор молярной концентрации 0,02 моль/дм.

4.2.3 Спирт изобутиловый (изобутанол) чистотой не менее 98%.

4.2.4 Натрий фосфорнокислый однозамещенный чистотой не менее 99,8%.

4.2.5 Кислота соляная массовой долей 36%.

4.2.6 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.

4.2.7 Кислота серная, раствор молярной концентрации 0,05 моль/дм.

4.2.8 Натрия гидроокись чистотой не менее 99%.

4.2.9 Натрия гидроокись, раствор массовой концентрации 150 г/дм.

4.2.10 Натрия гидроокись, раствор массовой концентрации 200 г/дм.

4.2.11 Калия гексацианоферрат (III) чистотой не менее 99%.

4.2.12 Калия гексацианоферрат (III), раствор массовой концентрации 10 г/дм.

4.2.13 Калия гексацианоферрат (III), щелочной раствор массовой концентрации 0,4 г/дм для предколоночной дериватизации

Раствор гексацианоферрата (III) калия (см. 4.2.12) объемом 2 см разбавляют раствором гидроокиси натрия (см. 4.2.9) до объема 50 см.

Раствор готовят в день проведения испытания.

4.2.14 Калия гексацианоферрат (III), щелочной раствор массовой концентрации 0,5 г/дм для послеколоночной дериватизации

Раствор гексацианоферрата (III) калия (см. 4.2.12) объемом 2,5 см разбавляют раствором гидроокиси натрия (см. 4.2.10) до объема 50 см.

4.2.15 Дефосфорилирующий фермент, пригодный для гидролиза связанного тиамина в пробе.

Примечание - При установлении характеристик прецизионности методики использована така-диастаза*.

________________

* Така-диастаза N Т00040 - торговое наименование изделия, выпускаемого Platz and Bauer, Waterbury, СТ 06708, США. Данная информация приведена для удобства пользования настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС данного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии обеспечения идентичных результатов.

4.2.16 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 2,5 моль/дм.

4.2.17 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 0,5 моль/дм.

4.2.18 Подвижные фазы для ВЭЖХ

Варианты подвижных фаз подходящего состава приведены в приложении A. В частности, в качестве подвижных фаз используют смеси метанола с водой, фосфатным или ацетатным буферным раствором при объемной доле метанола от 10% до 50%, а также подвижные фазы с добавлением ион-парных реагентов.

4.2.19 Раствор буферный фосфатный (3,5) молярной концентрации однозамещенного фосфата калия 9,0 ммоль/дм.

4.2.20 Тетраэтиламмония хлорид чистотой не менее 98%.

4.2.21 Натрия гептансульфонат чистотой не менее 98%.

4.2.22 Раствор буферный ацетатный (4) молярной концентрации уксусной кислоты 50 ммоль/дм.

4.3 Образцы сравнения
     

    4.3.1 Общие положения

Гидрохлорид тиаминхлорида выпускается многими производителями, при этом его чистота может различаться. Это обусловливает необходимость определения концентрации градуировочного раствора тиамина спектрофотометрическим методом по 4.4.4.

4.3.2 Тиаминхлорида гидрохлорид () чистотой не менее 99%.

4.3.3 Тиаминмонофосфатхлорид () чистотой не менее 98%.