ГОСТ EN 14152-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение витамина  с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of vitamin by HPLC

МКС 67.050

Дата введения 2015-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ "ВНИИКОП" Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 марта 2014 г. N 100-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14152-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту ЕN 14152:2003* "Продукты пищевые. Определение витамина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии" ("Foodstuffs - Determination of vitamin by HPLC", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN.

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВЗАМЕН ГОСТ 25999-83 в части раздела 2

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.     

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание витамина определяется как содержание рибофлавина.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстракции рибофлавина из пробы путем кислотного гидролиза, последующем ферментативном дефосфорилировании рибофлавина и его количественном определении с помощью ВЭЖХ с флюориметрическим детектированием [1]-[8].

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.

4.2 Реактивы и растворы

4.2.1 Метанол чистотой не менее 99,8%.

4.2.2 Натрий уксуснокислый трехводный чистотой не менее 99%.

4.2.3 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.

4.2.4 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 2,5 моль/дм.

4.2.5 Кислота уксусная ледяная чистотой не менее 99,8%.

4.2.6 Кислота уксусная, раствор молярной концентрации 0,02 моль/дм.

4.2.7 Кислота соляная массовой долей 35%.

4.2.8 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.

4.2.9 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,01 моль/дм.

4.2.10 Кислота серная, раствор молярной концентрации 0,05 моль/дм.

4.2.11 Натрия гидроокись чистотой не менее 99%.

4.2.12 Натрия гидроокись, раствор молярной концентрации 0,5 моль/дм.

4.2.13 Фосфора пентоксид чистотой не менее 98%.

4.2.14 Дефосфорилирующий фермент, пригодный для гидролиза связанного рибофлавина в пробе.

Примечание - При установлении характеристик прецизионности методики использована така-диастаза*.

_______________

* Така-диастаза N Т00040 - торговое наименование изделия, выпускаемого Platz and Bauer, Waterbury, CT 06708, США. Данная информация приведена для удобства применения настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС данного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии обеспечения идентичных результатов.

4.2.15 Подвижные фазы для ВЭЖХ

Варианты подвижных фаз подходящего состава приведены в пояснении к рисунку A.1 приложения A и в приложении C. В качестве подвижных фаз используют смеси метанола (см. 4.2.1) с водой, фосфатным или ацетатным буферным раствором при объемной доле метанола от 10% до 50%, а также подвижные фазы с добавлением ион-парных реагентов.

4.2.16 Раствор буферный фосфатный (3,5) молярной концентрации однозамещенного фосфата калия 9,0 ммоль/дм.

4.2.17 Тетраэтиламмония хлорид чистотой не менее 98%.

4.2.18 Натрия гептансульфонат чистотой не менее 98%.

4.3 Образцы сравнения

4.3.1 Рибофлавин () чистотой не менее 98%

Рибофлавин выпускают многие производители, при этом его чистота может различаться. Это обусловливает необходимость определения концентрации градуировочного раствора рибофлавина спектрофотометрическим методом по 4.4.3.

4.3.2 Рибофлавин-5'-фосфат

Натриевая соль рибофлавин-5'-фосфата () чистотой не менее 95%.

4.4 Основной раствор рибофлавина
     

    4.4.1 Меры предосторожности

Рибофлавин весьма чувствителен к свету, поэтому образец сравнения рибофлавина и его растворы необходимо защищать от действия света путем всевозможных приемов, например, путем использования для их хранения сосудов из темного стекла.

4.4.2 Приготовление основного раствора рибофлавина массовой концентрации 100 мкг/см

Образец сравнения рибофлавина перед использованием высушивают и хранят в темноте в эксикаторе с помещенным в него пентоксидом фосфора (см. 4.2.13) или под вакуумом. Около 50 мг образца сравнения, измеренного с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу темного стекла вместимостью 500 см и растворяют в растворе уксусной кислоты (см. 4.2.6).

Срок хранения полученного раствора в темноте при температуре 4°C - 2 мес.

Рибофлавин трудно растворим, поэтому для облегчения его растворения в мерную колбу с образцом сравнения вносят сначала 300 см раствора уксусной кислоты (см. 4.2.6). Колбу выдерживают на паровой бане при постоянном перемешивании до полного растворения рибофлавина. После охлаждения объем содержимого колбы доводят до метки раствором уксусной кислоты (см. 4.2.6). В качестве альтернативы в колбу с образцом сравнения вносят 5 см раствора гидроокиси натрия (см. 4.2.12). Поскольку рибофлавин нестабилен в щелочной среде, немедленно после его растворения в колбу вносят 1,5 см уксусной кислоты (см. 4.2.5), после чего объем содержимого колбы доводят до метки раствором уксусной кислоты (см. 4.2.6). Точную концентрацию основного раствора рибофлавина определяют по 4.4.3.

4.4.3 Определение точной концентрации основного раствора рибофлавина