Профессиональное решение
для инженеров-конструкторов и проектировщиков


ГОСТ Р 54950-2012
(ИСО 14565:2000)

Группа С19

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Animal feeding stuffs. Determination of vitamin A content by high-performance liquid chromatography method



ОКС 65.120

ОКСТУ 9209

Дата введения 2013-07-01

     

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП") на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 "Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 июля 2012 г. N 212-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 14565:2000* "Корма для животных. Определение содержания витамина А. Метод с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии" (ISO 14565:2000 "Animal feeding stuffs - Determination of vitamin A content - Method using high-performance liquid chromatography") путем изменения отдельных фраз, слов, наименований единиц измерения, ссылок, которые в тексте стандарта выделены курсивом**. При этом потребности национальной экономики Российской Федерации и особенности Российской национальной стандартизации учтены в дополнительных подразделах 6.7-6.21, которые выделены путем заключения их в рамки из тонких линий, а информация с объяснением включения этих положений приведена в виде примечаний.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей;

** В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе "Предисловие" приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.


Структура национального стандарта соответствует структуре международного стандарта, за исключением подразделов 6.5 и 9.3, которые разбиты на пункты для использования ссылок на описание прибора и повторяющиеся этапы испытаний, раздел 2 дополнен ссылками на национальные и межгосударственные стандарты для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3), и сведениями о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном стандарте.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с правилами, установленными ГОСТ Р 1.5 (подраздел 3.5), ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного международного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012* (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

_______________

* В бумажном оригинале наименование и обозначение стандарта выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.  

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на корма для животных и устанавливает метод определения содержания витамина А (ретинола) с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб (ИСО 6498:1998, MOD)

ГОСТ Р 51568-99 (ИСО 3310-1-90) Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Технические условия

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения


В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание витамина А: Содержание всех изомеров ретинола, определенное в соответствии с настоящим стандартом и выраженное в международных единицах на килограмм (МЕ/кг).

Примечание - 1 ME витамина А соответствует 0,300 мкг изомеров ретинола.

     4 Сущность метода*

_________________

* Наименование раздела 4 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Сущность метода заключается в омылении анализируемой пробы водно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витамина А петролейным эфиром, выпаривании петролейного эфира и растворении полученного остатка в 2-пропаноле. Содержание витамина А в 2-пропаноловом экстракте определяют с помощью ВЭЖХ обратными фазами, используя условия, в которых получается один пик для всех изомеров ретинола.

     5 Реактивы

5.1 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.2 Калия гидроокись (КОН) по ГОСТ 24363, раствор с массовой долей 50%

500 г гидроокиси калия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см (см. 6.17), растворяют в дистиллированной воде (см. 5.1) и доводят объем раствора водой до метки.

5.3 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 с объемной долей 95% или эквивалентный технический метилированный спирт.

5.4 2-пропанол .

5.5 Эфир петролейный, интервал температуры кипения от 40 °С до 60 °С. Остаток после выпаривания должен быть не более 20 мг/дм.

5.6 Стандартный образец витамина А (ретинил-ацетата)

5.6.1 Ретинил-ацетат, ацетат витамина А молярной массой 328,5 г/моль, чистота не менее 90%.

5.6.2 Ретинол, витамин А спирт молярной массой 286,5 г/моль, чистота не менее 90%.

5.7 Спирт метиловый специальной марки для ВЭЖХ.

5.8 Подвижная фаза для жидкостной хроматографии

Смешивают метиловый спирт (см. 5.7) и дистиллированную воду (см. 5.1) в соотношении 770:30 по объему и при необходимости фильтруют через мембранный фильтр (см. 6.6).

5.9 Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, безводный.

5.10 Натрия аскорбат, раствор массовой концентрации 100 г/дм.

5.11 Инертный газ, например, азот по ГОСТ 9293.

Примечание - Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

     6 Средства измерений, оборудование и материалы*

_______________

* Слова "Средства измерений" "и материалы" в наименовании раздела 6 в бумажном оригинале выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

6.1 Высокоэффективный жидкостный хроматограф, состоящий из следующего оборудования:

6.1.1 Насос, установленный для подачи элюента с постоянной объемной скоростью 1 см/мин.

6.1.2 Устройство для ввода ВЭЖХ.

6.1.3 Колонка длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, набивная, неподвижная фаза состоит из октадециловых групп , присоединенных к кремнезему.

Колонка считается удовлетворительной, если число теоретических тарелок не менее 4000, значение коэффициента емкости равно 0,6 в отношении изомеров ретинола. Рекомендуемый размер частиц от 5 до 10 мкм.

Допускается использовать другие системы при условии, что достигается удовлетворительное отделение витамина А от других экстрагируемых с ним веществ.

6.1.4 Детектор, позволяющий производить измерение ультрафиолетового (УФ) излучения при длине волны 325 нм и оснащенный интегратором (системой обработки данных).

6.2 Спектрометр в УФ области спектра (или в УФ-видимой области спектра), обеспечивающий измерение поглощения при длине волны, определенной в 9.6, оснащенный кварцевыми кюветами с длиной оптического пути 10 мм.

6.3 Баня с кипящей водой.

6.4 Испаритель роторный вакуумный с водяной баней при температуре 40 °С.

6.5 Аппарат для экстракции (см. рисунок 1), состоящий из следующего: