ГОСТ Р 54496-2011 (ИСО 8692:2004) Вода. Определение токсичности с использованием зеленых пресноводных одноклеточных водорослей
Приложение ДА
(обязательное)
Приготовление питательной среды
ДА.1 Приготовление питательной среды для методов А и В
ДА.1.1 Приготовление исходных растворов для питательной среды Прата
Исходные растворы N 1 - N 4 для питательной среды Прата готовят на дистиллированной воде (см. 5.2) из реактивов в массовых концентрациях, приведенных в таблице ДА.1.
Таблица ДА.1 - Питательная среда Прата для методов А и В
Номер исходного раствора | Реактив | Массовая концентрация реактива в исходном растворе, мг/дм | Массовая концентрация реактива в питательной среде, мг/дм |
1 | Азотнокислый калий по ГОСТ 4217 | 100000 | 100,0 |
2 | Магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 4523 | 10000 | 10,0 |
3 | Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493 | 10000 | 10,0 |
4 | Хлорид железа 6-водный по ГОСТ 4147 | 1000 | 1,0 |
Исходные растворы хранят при температуре 2 °С - 4 °С не более года.
ДА.1.2 Приготовление питательной среды Прата
Питательную среду Прата готовят следующим способом: в мерную колбу вместимостью 1000 см вносят дистиллированной воды до метки, затем переливают в колбу вместимостью 2000 см
и добавляют по 1 см
исходных растворов N 1, N 2 и N 3 (см. таблицу ДА.1), перемешивают, плотно закрывают ватно-марлевой пробкой и колпачком, кипятят на водяной бане в течение 15 мин, после чего содержимое охлаждают. После охлаждения через 24 ч добавляют 1 см
исходного раствора N 4, снова перемешивают, плотно закрывают новой ватно-марлевой пробкой и колпачком.
Приготовленную питательную среду Прата хранят в условиях, исключающих воздействие света, при температуре (20±5) °С не более одного года.
ДА.2 Приготовление питательной среды для метода Б
ДА.2.1 Приготовление исходных растворов
Исходные растворы N 1 - N 4 для питательной среды готовят на деионизированной воде или воде альтернативной чистоты (см. 5.2). Состав исходного раствора и массовая концентрация реактивов приведены в таблице ДА.2.
Таблица ДА.2 - Питательная среда для метода Б
Номер исходного раствора | Состав раствора | Массовая концентрация реактива в исходном растворе, мг/дм | Массовая концентрация реактива в питательной среде, мг/дм |
1 | Аммоний хлористый по ГОСТ 3773 | 1500 | 15,0 |
Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209 | 1200 | 12,0 | |
Кальций хлористый 2-водный | 1800 | 18,0 | |
Магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 4523 | 1500 | 15,0 | |
Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198 | 160 | 1,6 | |
2 | Хлорид железа 6-водный по ГОСТ 4147 | 64 | 0,64 |
Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по ГОСТ 10652 | 100 | 0,10 | |
3 | Борная кислота по ГОСТ 9656 | 185 | 0,185 |
Марганец хлористый 4-водный по ГОСТ 612 | 415 | 0,415 | |
Цинк хлористый по ГОСТ 4529 | 3,0 | 0,003 | |
Кобальт хлористый 6-водный по ГОСТ 4525 | 1,5 | 0,0015 | |
Медь двухлористая 2-водная по ГОСТ 4167 | 0,01 | 0,0001 | |
Натрий молибденовокислый 2-водный по ГОСТ 10931 | 7,0 | 0,007 | |
4 | Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201 | 50000 | 50,0 |
* Борную кислоту растворяют при добавлении раствора гидроокиси натрия | |||
*
по Приготовленные исходные растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.
Примечание - Исходные растворы N 1 - N 3 допускается стерилизовать в автоклаве при температуре 120 °С в течение 15 мин. Исходный раствор N 4 не стерилизуют в автоклаве, чтобы избежать потерь от разложения натрия углекислого кислого 
.
Исходные растворы хранят при температуре 2 °С - 4 °С не более года.
ДА.2.2 Приготовление питательной среды
Питательную среду готовят следующим способом: в мерную колбу вместимостью 1000 см вносят около 500 см
деионизированной воды (см. 5.2), добавляют 10 см
исходного раствора N 1 и по 1,0 см
исходных растворов N 2, N 3 и N 4 (см. таблицу ДА.2), после чего мерную колбу доводят до метки деионизированной водой.
Если необходимо автоклавирование раствора питательной среды, то исходный раствор N 4 добавляют после автоклавирования.
Питательную среду хранят в емкости из темного стекла с притертой крышкой (вместимостью до 10 дм) при температуре (20±2) °С - не более года.
Перед использованием приготовленную питательную среду выдерживают на воздухе в течение 7 ч или аэрируют очищенным воздухом в течение 30 мин с использованием микрокомпрессора. Затем, при необходимости, доводят рН питательной среды до значения (8,1±0,2) путем добавления раствора соляной кислоты молярной концентрацией 1,0 моль/дм или раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 1,0 моль/дм
.