4.1 Сущность метода
4.1.1 Метод основан на количественном определении прогидролизованного крахмала в результате его гидролиза ферментами амилолитического комплекса до декстринов различной молекулярной массы в стандартных условиях (температура 30°С, значение рН 6,0 - для бактериальных и 4,7 - для грибных -амилаз, продолжительность гидролиза 10 мин).
4.1.2 За единицу амилолитической активности (АС) принято такое количество фермента, которое при определенных значениях рН (6,0 - для бактериальных и 4,7 - для грибных -амилаз) и температуре 30°С за 1 ч катализирует гидролиз 1 г крахмала до декстринов различной молекулярной массы, что составляет 30% крахмала, введенного в реакцию. Активность выражается в ед. АС/г (для порошкообразного) или в ед. АС/см (для жидкого) анализируемого ферментного препарата.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.1.3 Количество прогидролизованного крахмала определяется колориметрическим методом по степени окраски остаточного крахмала раствором йода.
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы
4.2.1 Для определения амилолитической активности используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, реактивы, материалы:
- весы неавтоматического действия по ГОСТ Р 53228 с пределами абсолютной допускаемой погрешности не более ±0,5 мг, а также весы с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,02 мг;
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр любого типа, обеспечивающий измерения при длине волн 440 и 670 нм с погрешностью измерения коэффициента пропускания ±1% в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;
- рН-метр любого типа для измерения в диапазоне рН от 0 до 14 с пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±0,1 единицы рН;
- холодильник бытовой;
- мешалку магнитную любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;
- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры ±1°С;
- баню водяную любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100±1)°С с точностью регулирования температуры ±1°С;
- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью ±1,5 с;
- пипетки автоматические емкостью от 0,1 до 1,0 см и от 0,2 до 5,0 см с наконечниками;
- встряхиватель V-3 типа Вортекс или аналогичный для перемешивания жидкости со скоростью вращения от 50 до 3400 об./мин;
- термометры ртутные стеклянные лабораторные от 0°С до 50°С и от 0°С до 100°С с ценой деления шкалы 0,5°С по ГОСТ 28498;
- ареометры общего назначения по ГОСТ 18481;
- стаканы и колбы стеклянные лабораторные В-1-150 ТС, В-1-800 ТС, Кн-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336;
- стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-19/9 по ГОСТ 25336;
- воронки В-75-140 ХС по ГОСТ 25336;
- пробирки П1-14-120, П1-16-150, П1-21-200 по ГОСТ 25336;
- колбы мерные 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-200-2, 1-250-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770;
- цилиндры 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2 по ГОСТ 1770;
- пипетки стеклянные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 по ГОСТ 29227;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;
- крахмал растворимый по ГОСТ 10163;