ГОСТ Р 51196-2010
(ИСО 8069:2005)

Группа Н19

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ


МОЛОКО СУХОЕ

Определение содержания молочной кислоты и лактатов

Dried milk. Determination of content of lactic acid and lactates

ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209

Дата введения 2012-01-01

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" и Государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования "Московский государственный университет пищевых производств" на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 688-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 8069:2005* "Молоко сухое. Определение содержания молочной кислоты и лактатов" (ISO 8069:2005 "Dried milk - Determination of content of lactic acid and lactates") путем изменения отдельных слов, ссылок, которые выделены в тексте курсивом

_________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

5 ВЗАМЕН ГОСТ Р 51196-98 (ИСО 8069-86)

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает ферментативный метод селективного определения в сухом молоке содержания D- и L-изомеров молочной кислоты и ее солей лактатов.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения (ИСО 5725-1:1994, IDT)
     
     ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений (ИСО 5725-2:1994, IDT)
     
     ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание L- и D-молочной кислоты и L- и D-лактатов: Массовая доля молочной кислоты и лактатов, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в миллиграммах молочной кислоты на 100 г сухих обезжиренных веществ.

    4 Сущность метода

Навеску пробы сухого молока растворяют в теплой воде, далее фильтруют. В полученный фильтрат вносят следующие биохимические реактивы - ферменты [1], коферменты и активаторы, которые добавляют одновременно, но в указанной последовательности для проведения следующих реакций:

a) для окисления L- и D-молочной кислоты, L- и D-лактата в присутствии никотинамидадениндинуклеотида (НАД) до пирувата и преобразования НАД в восстановленную форму НАДН - L-лактатдегидрогеназу (L-ЛДГ) и D-лактатдегидрогеназу (D-ЛДГ);

b) для преобразования в присутствии L-глутамата пирувата в L-аланин и L-глутамата в -кетоглутарат - глутамат-пируват-трансаминазу (ГПТ).

Количество образовавшегося НАДН, которое пропорционально содержанию L- и D-молочной кислоты и L- и D-лактатов, определяют спектрофотометрически измерением оптической плотности инкубационной смеси при длине волны 340 нм.

    5 Реактивы

Используют реактивы только установленной аналитической степени чистоты. Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной, полученной на стеклянном оборудовании, а вода, используемая для других целей, должна быть дистиллированной.

5.1 Раствор калия гексацианоферрата(II), (K[Fe(CN)]·3HO)=35,9 г/дм

Растворяют в воде 35,9 г тригидрата калия гексацианоферрата(II). Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.

5.2 Раствор цинка сульфата, (ZnSO·7HO)=71,8 г/дм

Растворяют в воде 71,8 г гептагидрата сульфата цинка. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.

5.3 Растворы натрия гидроксида
     

    5.3.1 Раствор I натрия гидроксида, (NaOH)=10 моль/дм

Растворяют в воде 400 г натрия гидроксида. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.

5.3.2 Раствор II натрия гидроксида, (NaOH)=0,1 моль/дм

Растворяют 4,0 г натрия гидроксида в воде. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.

5.4 Раствор глицерина (CHO), с объемной долей глицерина 50%.   

    5.5 Раствор аммония сульфата, [(NH)SO]=3,2 моль/дм

Растворяют 422,84 г аммония сульфата в воде. Разбавляют водой до 1000 см и перемешивают.

5.6 Буферный раствор, pH 10

Растворяют 7,92 г глицилглицина (CHNO) и 1,47 г L-глутаминовой кислоты (CHNO) в 80 см воды. Устанавливают pH (10,0±0,1) при 20 °C раствором I гидроксида натрия (см. 5.3.1) и при постоянном перемешивании доводят объем раствора водой до 100 см.

Раствор хранят не более 3 мес при температуре от 0 °C до 5 °C.

5.7 Раствор никотинамид-аденин-динуклеотида (НАД)

Растворяют 350 мг никотинамид-аденин-динуклеотида (CHNOP) в 10 см воды.

Полученный раствор хранят в течение 1 мес при температуре от 0 °C до 5 °C. Во время использования сосуд с раствором должен быть погружен в емкость с дробленым льдом.

5.8 L-лактатдегидрогеназа (L-ЛДГ), из суспензии мышцы свиньи

10 мг суспензии L-лактатдегидрогеназы растворяют в 1 см раствора глицерина (5.4). pH полученной суспензии должен быть около 7. Если удельная активность L-ЛДГ менее 5500 ед./см, проводят повторное приготовление раствора фермента согласно вышеприведенным указаниям.

Раствор L-ЛДГ стабилен в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.

Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.

5.9 D (D-ЛДГ) (из культуральной жидкости Lactobacillus leichmannii)

5 мг суспензии D-ЛДГ растворяют в 1 см раствора сульфата аммония (см. 5.5) pH полученной суспензии должен быть около 6. Удельная активность D-ЛДГ должна быть не менее 1500 ед./см при 25 °C.

Если это не так, приготовляют другую суспензию D-ЛДГ.

Суспензия D-ЛДГ стабильна в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.

Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.

5.10 Глутамат-пируват-трансаминаза (ГПТ), из свиного сердца

20 мг суспензии ГПТ растворяют в 1,0 см раствора сульфата аммония (см. 5.5). pH полученной суспензии должен быть около 7. Удельная активность суспензии глутамат-пируват-трансаминазы должна быть не менее 1600 ед./см при 25 °C. Если это не так, приготовляют другую суспензию ГПТ.

Добавляют 1,0 см раствора сульфата аммония (см. 5.5) к 1 см суспензии с 20 мг ГПТ и перемешивают. Центрифугируют полученные 2,0 см суспензии, содержащей 10 мг ГПТ/см при радиальном ускорении 4000 g в течение 10 мин. Переносят 1,0 см прозрачной надосадочной жидкости, удаляют оставшиеся раствор и осадок.

Суспензия D-ЛДГ стабильна в течение 12 мес при хранении в холодильнике при температуре от 0 °C до 5 °C.

Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.

5.11 Раствор L-лактата лития

50 мг L-лактата лития (CHOLi) растворяют в воде. Разбавляют водой до 500 см и перемешивают.     

5.12 Раствор L-лактата лития

50 мг D-лактата лития (CHOLi) растворяют в воде. Разбавляют водой до 500 см и перемешивают.