ГОСТ Р 53913-2010
(ИСО 16654:2001)

     
Группа Н09

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Горизонтальный метод обнаружения Escherichia coli О157

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Escherichia coli О157

ОКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 2012-01-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 ноября 2010 г. N 365-ст

4 Настоящий национальный стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 16654:2001* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения Escherichia coli О157" (ISO 16654:2001 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Escherichia coli О157") путем изменения содержания отдельных структурных элементов, которые выделены курсивом** или заключены в рамку.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.

** В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделах "Предисловие", 6, 8 и таблице ДА.1 приложения ДА приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Сведения о соответствии ссылочных национальных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в указанном международном стандарте, приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, корма для животных и устанавливает метод обнаружения бактерий Escherichia coli О157 с обязательным использованием четырех последовательных стадий.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Бактерия Escherichia coli О157 может вызывать тяжелую болезнь, опасную для жизни, и имеет низкую дозу инфекционности. Зарегистрировано приобретенное внутрилабораторное заражение.

В целях защиты здоровья персонала лаборатории важно, чтобы этот метод обнаружения выполняли только квалифицированные сотрудники, используя общепринятую лабораторную практику и предпочтительно работая в защищенном производственном помещении. В отношении данного организма необходимо придерживаться требований соответствующих национальных регламентов о здоровье и безопасности на рабочих местах.

Следует соблюдать меры безопасности при утилизации всех инфекционных материалов.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р ИСО 7218, а также следующий термин с соответствующим определением:

3.1 escherichia coli О157 (Е. coli О157): Микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на поверхности засеваемой в чашке среды, а также индол, и специфическим образом агглютинируют с антисывороткой к антигену О157.

Примечания:

1 Сорбит-положительные штаммы Е. coli О157 не обнаружены в среде CT-SMAC (5.2).

2 Обнаружены некоторые индол-отрицательные мутации.

     4 Сущность метода*

_________________

* Наименование раздела 4 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Обнаружение Escherichia coli О157 связано с обязательным использованием четырех последовательных стадий в соответствии с приложением А:

- обогащение пробы для анализа, гомогенизированной в модифицированном триптон-соевом бульоне, содержащем новобиоцин (mTSB + N), с инкубацией при температуре (41,5±1) °С в течение 6 ч, а затем еще в течение 12-18 ч;

- сепарация и концентрация микроорганизмов с помощью иммуномагнитных частиц, связанных с антителами к бактерии Е. coli О157;

- выделение путем пересева иммуномагнитных частиц с налипшими бактериями на агаровую среду Мак-Конки, в которую добавляют сорбит и суплемент СТ (цефиксим и теллурит калия) (CT-SMAC), и на выбранную заказчиком вторую селективную агаровую среду для выделения;

- подтверждение идентификации сорбит-негативных колоний на среде CT-SMAC и колоний типичных для Е. coli О157 на второй агаровой среде для выделения в результате образования индола и агглютинации с антисывороткой к Е. coli О157.

Примечание - Определение других характеристик положительных штаммов, например, с помощью патогенных маркеров, возможно после их передачи в соответствующую референтную лабораторию.

     5 Питательные среды, реактивы и антисыворотки

Общие правила микробиологических исследований - по ГОСТ Р ИСО 7218.

5.1 Обогатительная среда (модифицированный триптон-соевый бульон с новобиоцином (mTSB + N)

Состав:

5.1.1 Приготовление среды

Растворяют компоненты или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Устанавливают уровень рН, используя рН-метр (см. 6.6), если необходимо, так, чтобы после стерилизации он соответствовал рН (7,4±0,2) при температуре 25 °С.

Разливают среду в соответствующих количествах в колбы или склянки (6.7).

Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве (см. 6.1) при температуре 121 °С.

5.1.1.1 Раствор новобиоцина

Состав:

Приготовление раствора:

Растворяют новобиоцин в воде и стерилизуют фильтрованием через микропористую мембрану.

Готовят раствор перед определением.

5.1.1.2 Приготовление готовой среды

Непосредственно перед применением в среду (см. 5.1.1) добавляют 1 см или 4 см раствора новобиоцина (см. 5.1.1.1 или к 225 см, или к 900 см охлажденной среды mTSB (см. 5.1.1).

Конечная концентрация новобиоцина равна 20 мг/дм среды mTSB.

5.2 Первая селективная среда для выделения микроорганизмов: агаровая среда Мак-Конки с сорбитом и суплементом СТ (цефиксим и теллурит калия) (CT-SMAC)

5.2.1 Основная среда

Состав:

_______________

* В зависимости от прочности геля.

5.2.1.1 Приготовление среды

Растворяют основные компоненты или готовую дегидратированную основу в воде, при необходимости кипятят. Устанавливают уровень рН (см. 6.6), если необходимо, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,1±0,2) при температуре 25 °С, стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве (см. 6.1) при температуре 121 °С.