МУ 3.5.2435-09 Методы изучения и оценки спороцидной активности дезинфицирующих и стерилизующих средств

4. Обеспечение стандартности условий проведения исследований спороцидной активности ДС, СС и их субстанций

Химико-аналитический контроль ДС, СС и их субстанций. До проведения исследования спороцидной активности ДС, СС и их субстанций необходимо проанализировать представленные производителем утвержденные рецептуры средства и технические условия на отечественные или спецификацию на зарубежные средства, провести химико-аналитические исследования по определению концентрации действующих веществ и определить соответствие ее и других показателей, регламентированных вышеуказанными документами. При этом используют химико-аналитические методы контроля и применяют условия хранения средства и меры безопасности при работе с ним, предложенные производителем средства.

Выбор, приготовление и контроль эффективности нейтрализаторов ДС с целью исключения остаточного спороцидного или споростатического действия ДС, СС и их субстанций на тест-микроорганизмы. Для дезинфекции и стерилизации применяют средства, обладающие спороцидным действием, т.е. убивающие споры, но не задерживающие только их рост. Поэтому при определении спороцидного действия необходимо разграничить спороцидное действие средства от споростатического.

На основании накопленного опыта для нейтрализации антимикробного действия ДВ из различных химических групп (в зависимости от концентрации ДВ в растворе) применяют следующие нейтрализаторы:

для средств из группы окислителей (хлор-, йод-, перекись-содержащие средства; средства, содержащие надуксусную кислоту, озон) - 0,5-2,5% растворы тиосульфата натрия;

для альдегид- и фенолсодержащих средств - универсальный нейтрализатор, содержащий 3% полисорбита 80% (Твин-80), 3% сапонина, 0,1% гистидина и 0,1% цистеина; или 3% полисорбита 80%, 2% гистидина, 0,3% лецетина, 3% сапонина;

для катионных поверхностно-активных веществ - 1,0%-й раствор сульфонола или 0,5-1,0%-е растворы сульфонола с 10%-м обезжиренным молоком;

для композиционных ДС - универсальный нейтрализатор, например, содержащий 3% полисорбита 80%, 3% сапонина, 0,1% гистидина и 0,1% цистеина или 3% полисорбита 80%, 3% сапонина, 0,3% лецетина и 0,15% цистеина, 0,15% тиосульфата натрия, или другие нейтрализаторы, рекомендуемые производителями.

Растворы нейтрализаторов готовят в асептических условиях, применяя только стерильную дистиллированную воду. При невозможности соблюдения асептических условий приготовления нейтрализаторов допускается стерилизация готовых растворов автоклавированием при 1,1 кГс/см (121 °С) в течение 15 мин. Температура растворов нейтрализаторов должна быть 20 °С, независимо от температуры окружающей среды. Готовые растворы необходимо использовать в день приготовления. Допускается хранение готовых растворов при температуре 4 °С в течение 48 ч.

Контроль полноты нейтрализации остаточного действия испытываемого средства. Существующие рекомендации по применению нейтрализаторов рассчитаны для различных монодействующих веществ (ДВ). Однако многие современные ДС содержат несколько ДВ и другие вспомогательные вещества, которые могут обладать споростатическим действием. Поэтому существующие (рекомендуемые) нейтрализаторы могут не обеспечивать эффективную нейтрализацию остаточного действия таких ДС. В этой связи результаты оценки эффективности ДС могут быть необъективными. Поэтому каждый случай проведения испытаний, даже известного ДС, должен предварительно сопровождаться экспериментальным контролем эффективности нейтрализации остаточного действия ДС на тест-микроорганизм.

Для контроля эффективности нейтрализатора и полноты нейтрализации остаточного действия ДС используют суспензионный метод, как обеспечивающий наиболее жесткие условия действия нейтрализатора при проведении испытаний ДС. Последовательность и методология выполнения основных операций при проведении такого эксперимента и их назначение приведены на схеме рис.2 и в табл.3.

Высев из каждой пробирки по 0,1 мл на чашки Петри с соответствующей для тест-микроорганизма плотной питательной средой (не менее 3 на пробу)

Рис.2. Принципиальная схема проведения эксперимента по контролю эффективности нейтрализации действия ДС на споры тест-микроорганизма используемым нейтрализатором

     

Таблица 3

     
Назначение операций эксперимента по оценке эффективности нейтрализации остаточного действия ДС

Обеспечение техники безопасности при исследовании спороцидной активности ДС, СС и их субстанций. Споры тест-микроорганизмов обладают высокой устойчивостью, поэтому их гибель обеспечивают в большинстве случаев высокие концентрации ДС, СС и их субстанций и по препарату, и по ДВ. Поэтому при хранении, взвешивании, приготовлении рабочих растворов, их химико-аналитических исследованиях и проведении экспериментов необходимо применять меры защиты, предусмотренные в технических условиях на отечественные средства или спецификации - на зарубежные, с учетом класса опасности.

Все тест-микроорганизмы, кроме патогенных штаммов возбудителя сибирской язвы, относятся к III-IV классу опасности (патогенности), поэтому микробиологические исследования с ними следует проводить в асептических условиях при соблюдении правил техники безопасности, предусмотренных СП 1.3.000-06 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами" [9].

Лабораторные исследования с использованием патогенных штаммов возбудителя сибирской язвы должны проводить специалисты, прошедшие подготовку на курсах по особо опасным инфекциям, в лицензированных лабораториях, имеющих допуск на работу с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) при строгом соблюдении всех правил техники безопасности, предусмотренных СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности" [8].