МУК 4.2.2413-08 Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы

4. Материал для исследования, взятие, пересылка материала и подготовка проб для исследования

Все работы по забору, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала от людей и животных, из объектов окружающей среды осуществляют в строгом соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)", СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности", МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности".

4.1. Материал для исследования:

а) от больных или подозрительных на заболевание людей, в зависимости от формы заболевания - содержимое везикул, отделяемое карбункула или язвы, струпья, мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, моча, испражнения, экссудаты;

б) трупный материал - кровь, экссудаты, кусочки органов (селезенки, печени, лимфоузлов и др.);

в) материал от животных;

г) продовольственное сырье и продукты животного происхождения;

д) объекты окружающей среды - почва, трава, фураж, подстилка, вода и т. д.

Забор всех видов материала осуществляется в стерильную стеклянную или пластиковую посуду, соответствующую объему проб. Иммунофлуоресцентным, серологическим и бактериологическим методами исследуется соответствующий материал из общей пробы.

4.2. Взятие материала от животных

4.2.1. Для бактериологического исследования

В случае падежа животного в лабораторию направляют ухо и мазок, полученный из надреза уха. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигают. Отрезанное ухо заворачивают в пергаментную бумагу, смоченную в дезинфицирующем растворе. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного или в ходе вынужденного убоя, все манипуляции по вскрытию прекращают и на исследование направляют кровь, кусочки органов (селезенки, печени, лимфоузлов, в которых имеются характерные патологоанатомические изменения), костный мозг (из грудины или канала бедренной кости). Материалы от трупа необходимо брать и исследовать как можно раньше, так как из-за развития посторонней микрофлоры трудно выделить чистую культуру возбудителя сибирской язвы. От трупов свиней в обязательном порядке отбирают заглоточные лимфатические узлы и участки отечной соединительной ткани.

У животных с подозрением на заболевание или больных берут на исследование кровь с помощью шприца из яремной вены или из вены уха, а у свиней - из вены хвоста. В отдельных случаях у животных берут на исследования пробы каловых масс.

4.2.2. Для исследования методом ПЦР

Микробиоптат/микроаутоптат (пунктат) помещают в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-1,7 мл с завинчивающимися или защелкивающимися крышками, содержащие 0,1-0,2 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида или транспортной среды N 1 (прилож.1.8).

Макробиоптат/макроаутоптат (кусочки тканей массой 0,1-1,0 г) помещают в контейнер с 0,9%-м раствором натрия хлорида или транспортной средой N 2 (прилож.1.9).

4.3. Взятие материала от человека

4.3.1. Для бактериологического исследования

Забор материала от больных людей должен производиться до начала специфического лечения.

Необходимо осторожно обработать спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Содержимое везикулы отсасывают стерильным шприцем или стерильной тонко оттянутой обломанной пастеровской пипеткой. В пипетку обычно набирается небольшое количество опалесцирующей желтоватой жидкости в объеме, достаточном для посева на агаровую среду и для приготовления мазка. Затем иглу или кончик пипетки помещают в пробирку с питательным бульоном. Отделяемое язвы снимают с поверхности стерильным тампоном, смоченным 0,9%-м раствором натрия хлорида. Фрагменты отторгнутого струпа снимают влажным тампоном или пинцетом.

При всех формах заболевания из крови, взятой на анализ, возбудитель сибирской язвы можно выделить уже при первом повышении температуры тела. Кровь берут из локтевой вены стерильным шприцем в объеме 3-5 мл (с учетом необходимости проведения бактериологических, серологических исследований и ПЦР). Сразу же, непосредственно у постели больного, по 0,1-0,2 мл крови засевают на питательные среды (агар и бульон Хоттингера, рН 7,2-7,5). Одновременно на предметных стеклах делают 2-3 тонких мазка, а остатки крови оставляют для получения сыворотки. Если невозможно сразу же исследовать кровь, ее из шприца переносят в стеклянную посуду (бактериологические пробирки).

Мокроту и испражнения собирают в стерильную посуду. Для высева на питательные среды отбирают слизь с примесью крови.

При висцеральных формах сибирской язвы и менингите исследуют спинномозговую жидкость, которую отбирают после пункции поясничной, субокципитальной области или мозговых желудочков в количестве 0,5 мл в стерильную микроцентрифужную пробирку объемом 1,5-1,7 мл с завинчивающейся или защелкивающейся крышкой. При подозрении на ингаляционное заражение исследуют также мазки из полости носа. Их берут сухими стерильными ватными тампонами на зондах. Тампон вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную микроцентрифужную пробирку объемом 1,5-1,7 мл с завинчивающейся или защелкивающейся крышкой с 0,9%-м раствором натрия хлорида. Погрузив рабочую часть зонда в раствор натрия хлорида, вращают зонд в течение 10-15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.

4.3.2. Для исследования методом ПЦР