Недействующий
Профессиональные справочные системы для специалистов
медицинской и фармацевтической промышленности


ГОСТ Р 52471-2005

Группа С19

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА

Иммуноферментный метод определения микотоксинов

Feedstuffs. Immunoenzyme method of mycotoxin determination



ОКС 65.120

ОКП 92 0000

Дата введения 2007-01-01

     

Предисловие


Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" Россельхозакадемии

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 декабря 2005 г. N 489-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет

    1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает иммуноферментный метод определения содержания микотоксинов (афлатоксин В, роридин А, охратоксин А, стеригматоцистин, Т-2 токсин, зеараленон, фумонизин В) в кормах.

Настоящий стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза.

    2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 8.563-96 Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51088-97 Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия

ГОСТ 8.315-97 Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Реактивы. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Методы отбора проб

ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

    3 Термины, определения, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 8.563, ГОСТ Р ИСО 5725-1, ГОСТ Р 51088, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2 основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно из основного раствора и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.4 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ИФА - иммуноферментный анализ;

ОП - оптическая плотность;

АГ - антиген;

AT - антитела;

АНС - 8-анилин-1-нафталинсульфокислота;

ФДА - о-фенилендиамин.

    4 Сущность иммуноферментного метода определения


Иммуноферментный метод основан на измерении содержания микотоксинов в пробах с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА рабочих растворов экстрактов (рисунок 1).


Рисунок 1 - Основные этапы иммуноферментного метода определения



Непрямой ИФА основан на способности микотоксинов взаимодействовать со специфичными антителами (AT) в условиях конкуренции с белковым конъюгатом микотоксина, нанесенным на поверхность ячеек планшета, - твердофазным антигеном (АГ).

Аналитический сигнал (регистрируемое значение оптической плотности), измеряющий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации микотоксина в рабочем растворе.

    5 Прецизионность метода


Показатели прецизионности метода определены в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2, ГОСТ Р ИСО 5725-3 и представлены в таблице 1.


Таблица 1 - Показатели прецизионности метода иммуноферментного определения микотоксинов

Определяемый компонент

Содержание, мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости
, %

Относительное стандартное отклонение промежуточной прецизионности
, %

Предел повторяемости , %

Предел промежуточной прецизионности
, %

Афлатоксин В

0,002-0,050

15

18

42

50

Роридин А

0,004-0,100

13

16

36

45

Охратоксин А




Стеригматоцистин






Т-2 токсин

0,020-0,500

12

14

34

39

Зеараленон

Фумонизин B

0,050-5,000

12

14

34

39



Расхождение между результатами двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, может превышать предел повторяемости не более одного раза из двадцати.

Расхождение двух результатов анализа, полученных в условиях промежуточной (внутрилабораторной) прецизионности (разное время, разные операторы, разное оборудование), может превышать значение предела промежуточной прецизионности не более одного раза из двадцати.

    6 Требования к условиям выполнения измерений


Измерения проводят в лабораторных условиях при температуре окружающего воздуха (23±5) °С, атмосферном давлении (97±10) кПа, относительной влажности (65±15)%, частоте переменного тока (50±5) Гц, напряжении в сети (220±10) В.

    7 Средства измерений и вспомогательное оборудование


При выполнении измерений применяют следующие средства измерений и вспомогательное оборудование:

фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерения оптической плотности 0-2,5 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного измерения не более ±0,005 в комплекте с интерференционным светофильтром для длин волн 490-492 нм [1];

весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0002 г;

цилиндры по ГОСТ 1770 исполнения 1 вместимостью 25, 100, 1000 см;

колбы по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 100 см;

дозаторы пипеточные для объемов доз 0,005-0,05; 0,02-0,2; 1-5 см [2] в комплектах со сменными одноразовыми наконечниками;