МУК 4.1.1919-04

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение массовой концентрации авермектиновых комплексов
(аверсектина С и аверсектина С) в молоке и плазме животных
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
с флуоресцентным детектированием

     

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработчики: к.м.н. В.Г.Тер-Симонян, к.х.н. С.В.Авчук, к.б.н. Е.Б.Кругляк, д.б.н. Т.С.Новик (ООО НБЦ "Фармбиомед", Москва).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию Минздрава России.

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 5 августа 2004 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

Методические указания по определению массовой концентрации авермектиновых комплексов (аверсектина С и аверсектина С) в молоке и плазме животных предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции учреждениями Госсанэпидслужбы Российской Федерации, а также для предприятий и учреждений, осуществляющих контроль качества пищевых продуктов в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами "Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", СанПиН 2.3.2.1078-01 и МДУ ГН 2.3.2.708-98 и аккредитованных в установленном порядке.

2. Общие положения

Аверсектин С и Аверсектин С - противопаразитарные препараты, представляющие собой комплексы близких в химическом отношении веществ - авермектинов, образуемых культурой Str. avermitilis. Отличия между ними заключаются в соотношении отдельных авермектиновых компонентов: так, основным компонентом аверсектина С является авермектин В, тогда как основные компоненты аверсектина С - авермектины А и В.

Аверсектины С и С являются действующими веществами ряда противопаразитарных лекарственных средств, используемых в ветеринарии (1 и 20% аверсекта-2, аверсекта-3, мази аверсектиновой и др.).

Настоящие методические указания устанавливают хроматографическую методику количественного анализа молока и плазмы на содержание авермектинов после применения аверсектинсодержащих препаратов с нижним пределом измерения 0,001 мг/кг.

3. Физико-химические свойства, токсикологическая характеристика

Аверсектины С и С включают 4 гомологичных пары авермектинов: А; А; В; В, каждая из которых состоит из основного компонента, обозначаемого "а" и минорного - "в".

Авермектины представляют собой 16-членные макроциклические лактоны, содержащие по два остатка олеандрозы, соединенных гликозидной связью. Авермектиновые компоненты различаются между собой алкильными заместителями у 5-го и 26-го углеродных атомов и связью между 22 и 23 углеродными атомами (см. формулу).

Авермектины с индексом "в" (содержащие у 26-го углеродного атома радикал СН) являются минорными соединениями, их содержание в сумме не превышает 10% всего авермектинового комплекса.

Структурная формула

     

Эмпирическая формула и молекулярная масса авермектиновых компонентов

Все авермектины хорошо растворяются в низших спиртах: метиловом, этиловом и изопропиловом, бензиловом спирте, ацетоне, хлороформе, этилацетате, изооктане и практически не растворяются в петролейном эфире и воде.

В сухом виде авермектины являются мало устойчивыми соединениями.

Токсикологическая характеристика: все авермектины обладают нервно-паралитическим действием. По параметрам острой токсичности при введении в желудок аверсектин С и аверсектин С относятся к соединениям 2-го класса опасности. По острой кожной токсичности аверсектины относятся к соединениям со слабо выраженной кожно-резорбтивной токсичностью.

Аверсектины С и C не обладают мутагенным, тератогенным и алергенным действием.

4. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью, не превышающей 20% при доверительной вероятности 0,95.

5. Метод измерений

Измерения массовой концентрации авермектинов основаны на использовании ВЭЖХ с применением флуоресцентного детектора на колонке с обращенной фазой после экстракции их органическими растворителями из молока и плазмы с последующей очисткой экстрактов и получения флуоресцирующих производных. Флуоресцирующие производные авермектинов получают путем обработки их уксусным ангидридом в присутствии N-метилимидазола на кипящей бане в течение часа. Указанные условия обеспечивают образование флуоресцирующих производных всех авермектинов, при этом в процессе реакции авермектины группы А и B дают производные, имеющие одинаковое строение, а также как и авермектины группы А и В. Хроматографическое разделение производных ведут на колонке с обращенной фазой, детекцию производных осуществляют по интенсивности флуоресценции при длинах волн возбуждения и эмиссии 365 и 470 нм соответственно.

При хроматографировании производные авермектинов элюируют из колонки двумя пиками: 1-й по времени удерживания пик соответствует сумме производных А и В (А+В), второй - сумме производных группы А и В (А+В).

Примечание: в подобранных условиях хроматографирования производные минорных авермектинов имеют то же время удерживания, что и производные основных компонентов.

Таким образом, общее содержание авермектинового комплекса определяется суммой двух указанных пиков.

Минимальная определяемая концентрация производного, наносимая на колонку, составляет 0,35 нг.

6. Средства измерения, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы, растворы

6.1. Средства измерения

6.2. Вспомогательные устройства

6.3. Реактивы